大腸桿菌dna聚合酶1的作用與應(yīng)用資料

1、大腸桿菌DNA聚合酶 I,生物0822 0814151008 肖樂,大腸桿菌DNA聚合酶 I的活性,5’-3’DNA聚合酶活性,在引物RNA'-OH末端，以dNTP為底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ使DNA鏈沿5‘ → 3‘方向延伸。 3' Mg2+,dNTP 5'

2、 5' 3' DNA聚合酶I,,,,,,5’-3’外切核酸酶活性,從5'→3'方向水解DNA生長鏈前方的DNA鏈，主要產(chǎn)生5'-脫氧核苷酸。這種酶活性只

3、對DNA上配對部分(雙鏈)磷酸二酯鍵有切割活力作用，方向是5'→3'。 3' Mg2+ 5' 5'

4、 3' DNA聚合酶I,,,,,,3’-5’外切核酸酶活性,由3’端水解DNA鏈，反應(yīng)底物是帶3'-OH的雙鏈DNA或單鏈DNA，其活性從3'-OH端降解ds-DNA，可被5' 3'聚合活性封閉，也可被帶5'磷酸的dNMP抑制 5' M

5、g2+ Mg2+,dNTP 3' 3' 5' DNA聚合酶I DNA聚合酶I,,

6、,,,,,,,,活性能發(fā)生的反應(yīng),,,,,置換反應(yīng),如果只有一種dNTP存在，3' 5'外切核酸活性將從3'-OH端降解DNA，而5' 3'聚合酶活性又在合成DNA，然后在該位置發(fā)生一系列的合成和外切反應(yīng)，直到露出與該dNTP互補(bǔ)的堿基。 3' 5'外切酶活性 5'

7、; 3' 5' 3'聚合酶活性,,,,,,,,,切口平移,首先在鎂離子存在下用少量DNaseI處理雙鏈DNA模板，產(chǎn)生少量切口。在切口處利用大腸桿菌DNA聚合酶I

8、的5’-3’外切核酸酶活性是切口沿5’-3’方向移動，同時(shí)5’-3’DNA聚合酶活性又不斷合成DNA。 5' Mg2+ DNaseI 3' 5' dNTP 大腸桿菌DNA聚合酶I 3',,,,,,,,,,,,,,應(yīng)

9、用,3’-端的末端標(biāo)記,先用此酶的3’→5’核酸外切酶活性，切除凸出的3’-粘端，形成5’-凸出粘端；在以其5’→3’聚合酶活性使其使其補(bǔ)平，在高濃度dNTP的條件下，3’-端的外切反應(yīng)與dNTP的攙入反應(yīng)達(dá)到平衡。若dNTP中有放射性標(biāo)記的核苷酸，即可使產(chǎn)物成為3’-末端的帶標(biāo)記的DNA。,切口平移法標(biāo)記DNA,在Dnase的作用的基礎(chǔ)上產(chǎn)生連內(nèi)切口，應(yīng)用此酶的5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性的同步聯(lián)合反應(yīng)，使切口沿DNA鏈