免疫血清學(xué)實(shí)驗(yàn)

1、雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn) 直接凝集試驗(yàn),抗原（antigen, Ag）: 能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并能與之特異性結(jié)合的物質(zhì)。,抗體(antibody, Ab)： B細(xì)胞識(shí)別抗原后增殖分化為漿細(xì)胞所產(chǎn)生的可特異性結(jié)合抗原的一組糖蛋白。,抗原-抗體反應(yīng)的基本檢測方法,凝集反應(yīng)(agglutination):顆粒性抗原與抗體的反應(yīng)。,沉淀反應(yīng)(precipitation):可溶性抗原與抗體的反應(yīng)。,補(bǔ)體參與的反應(yīng),免疫標(biāo)記

2、技術(shù)（immunolabelling technique）:用示蹤物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體，進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)的檢測。,一、沉淀反應(yīng)-雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn),原理 用半固體瓊脂凝膠作為介質(zhì)，可溶性抗原、抗體在其中能自由擴(kuò)散。將可溶性抗原和抗體分別加入瓊脂板上相對(duì)應(yīng)的孔中，兩者各自向四周擴(kuò)散，如果抗原和抗體相對(duì)應(yīng)，則在兩者比例適當(dāng)處形成白色沉淀線。,主要材料,器材：載玻片、EP管、微量加樣器、槍頭、打孔器、 注射器針頭試

3、劑：生理鹽水、瓊脂粉、 抗原（正常小鼠IgG）、 抗體（兔抗小鼠IgG血清）,配制1%瓊脂：用生理鹽水配制，加熱溶解制板：趁熱將3.5ml融化瓊脂水平鋪在玻片上，室溫下冷卻凝固打孔：用打孔器按圖示打孔稀釋抗體：取5支EP管，將抗體倍比稀釋加樣：周圍孔加入不同稀釋度的抗體，中間孔加入抗原瓊脂板放入濕盒內(nèi)，置4℃，24-48小時(shí)后觀察結(jié)果。,實(shí)驗(yàn)步驟,Ag,1,2,3,4,5,control,6,,

4、倍比稀釋法,1:4,1:8,1:16,1:64,,100µL,100µL,100µL,100µL,100µL,100µL,100µL,,樣品管,,第一管,第二管,第四管,結(jié)果判斷,,,,,,,,應(yīng)用,測定抗體的效價(jià)用特異性抗體檢測抗原檢查抗原和免疫血清的特異性、純度或濃度，比較抗原之間的異同點(diǎn),兩個(gè)樣品為同一抗原,存在三種不同的抗原,兩個(gè)樣品部分相同,二、凝集反應(yīng)

5、,原理 顆粒性抗原(完整的病原微生物或紅細(xì)胞等)與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，在有電解質(zhì)存在的條件下，形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊。基本類型 直接凝集反應(yīng)、間接凝集反應(yīng)、凝集抑制反應(yīng)等。,直接凝集實(shí)驗(yàn)（ABO血型鑒定）,器材：酒精棉球、滅菌干棉球、微量加樣器、 滅菌槍頭、玻片、一次性采血針試劑 抗A試劑（藍(lán)色）、抗B試劑（黃色）,主要材料,實(shí)驗(yàn)步驟,干凈玻片上分別滴加抗A、抗B試劑各一滴酒精棉球消毒無