轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉抗蟲性鑒定方法研究.pdf

1、棉鈴蟲是棉花生長發(fā)育過程中的主要害蟲，常年受其危害造成的棉花減產(chǎn)特別嚴重。目前在棉花生產(chǎn)中，轉(zhuǎn)基因抗蟲棉得到了廣泛的推廣應用，如轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉等。由于我國轉(zhuǎn)基因抗蟲棉研究起步較晚，目前還沒有建立標準統(tǒng)一的轉(zhuǎn)Bt基因棉抗蟲性鑒定技術(shù)。本研究通過對國內(nèi)現(xiàn)有轉(zhuǎn)基因抗蟲棉鑒定方法的比較，對鑒定指標的考察和抗蟲性分級標準的劃分，以期為建立易于掌握、標準統(tǒng)一的轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉抗蟲性鑒定技術(shù)提供參考。
　　 1.2007年利用卡那霉素涂抹法

2、、Npt-Ⅱ的PCR檢測法及Bt金標免疫檢測試紙條檢測法對轉(zhuǎn)Bt基因材料的陽性株率進行了檢測。所檢測的8份材料中，只有綠億棉11號、中長雜4138和鄂雜棉10號的陽性株率相差較大，在10％以上。方差分析結(jié)果顯示，三種檢測方法之間的差異不顯著，不同材料之間的陽性株率差異較大，達到極顯著水平。對三種不同方法的陽性株率的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，三種方法的相關(guān)系數(shù)均在0.97以上，達到極顯著水平。說明三種檢測方法的檢測結(jié)果一致性高，而卡那霉素涂抹法

3、在這三種方法中最為簡單、經(jīng)濟，可以作為轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉陽性株率的主要檢測方法。
　　 2．轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉材料的陽性株率反映了材料本身的純度高低。將2007年三種方法的檢測結(jié)果平均以后發(fā)現(xiàn)，8份材料中，除綠億棉11號和湘雜棉10號的陽性株率較低之外，其他各材料的陽性株率均在90％以上，是合格的轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉。2008年所測的3份材料中，億K9F1的陽性株率為98％，廣源棉980和湘雜棉10號的陽性株率較低，不足80％。

4、　　 3．室內(nèi)生物測定法是轉(zhuǎn)基因抗蟲棉抗蟲性的主要檢測方法。2007年檢測的8份材料中，接蟲后5d，荊03-88和岡C04的幼蟲校正死亡率大于90％，抗性級別為高抗，其他各參試材料的幼蟲校正死亡率小于90％，抗性級別為抗；2008年的3份材料的幼蟲校正死亡率均在60％至90％之間，抗性級別為抗。葉片平均受害等級的統(tǒng)計結(jié)果顯示，接蟲后5d，2007年各參試材料中，湘雜棉10號葉片平均受害等級在2.1～2.5之間，其他各參試材料的葉片平均

5、受害等級均在2.0以下；2008年的3份材料中，湘雜棉10號的葉片平均受害等級為3.0，億K9F1和廣源棉980的抗性級別均小于2.5。存活幼蟲發(fā)育狀況的統(tǒng)計結(jié)果顯示，接蟲后5d，2007年各參試材料的存活幼蟲基本都在分布在1齡和2齡，而感蟲對照鄂棉24號的幼蟲基本達到3齡，且數(shù)目遠遠大于各參試材料的存活幼蟲數(shù)；2008年各參試材料的幼蟲體長和體重均比鄂棉24號的小，幼蟲體長減退30％左右，幼蟲體重減退50％～70％。以上結(jié)果表明，接蟲

6、后5d，轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉材料對棉鈴蟲幼蟲有明顯的抑制生長和毒殺作用。
　　 4.2008年，卡那霉素涂抹法對已知轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉雜交組合的親本及F1、F2分離群體檢測結(jié)果顯示，非抗蟲棉親本全部表現(xiàn)為陰性，轉(zhuǎn)基因抗蟲棉親本及F1全部表現(xiàn)為陽性，F(xiàn)2群體共檢測了147株，表現(xiàn)為轉(zhuǎn)基因的陽性株數(shù)與陰性株數(shù)的比為106：31，卡方測驗結(jié)果顯示，分離比符合3：1，說明Bt基因為單拷貝插入，顯性遺傳。室內(nèi)生物測定的各指標結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)Bt基因