版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、Bt殺蟲(chóng)基因是目前應(yīng)用得最為廣泛和最有潛力的一個(gè)抗蟲(chóng)基因,在蟲(chóng)害的防治中起到越來(lái)越重要的作用.目前獲得的轉(zhuǎn)Bt抗蟲(chóng)基因植物已達(dá)近70種,而新的Bt殺蟲(chóng)基因仍在不斷的被分離和鑒定,使得轉(zhuǎn)Bt抗蟲(chóng)基因植物的研究持續(xù)、高速發(fā)展,因此急需找到一種快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法.該研究以目前抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因育種中研究最多的Bt CryI A(C)基因的表達(dá)產(chǎn)物為檢測(cè)目標(biāo),在提取出高純度抗原并制備出高特異性抗體的基礎(chǔ)上,系統(tǒng)研究了兩種載體上三種酶聯(lián)免疫吸附測(cè)
2、定方法的檢測(cè)靈敏度,初步建立起快速、準(zhǔn)確的酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù).研究結(jié)果如下:一.采用多種生化技術(shù)提取蘇云金芽孢桿菌的殺蟲(chóng)晶體蛋白,制備出了高純度的抗原.首先用堿液(50mM Na2CO3,50mM EDTA,3﹪巰基乙醇)裂解孢晶混合物,調(diào)節(jié)PH至等電點(diǎn)沉淀出晶體殺蟲(chóng)蛋白,再用聚丙烯酰胺凝膠制備電泳進(jìn)一步純化粗提的殺蟲(chóng)晶體蛋白,經(jīng)SDS-PAGE電泳分析顯示只有一條帶,說(shuō)明獲得的分子量約為130KD的殺蟲(chóng)晶體蛋白達(dá)到了電泳純,為制備特異性
3、抗體提供了條件保障.二.制備出了高特異性的Bt殺蟲(chóng)蛋白抗體和高質(zhì)量的酶標(biāo)抗體.用純化的Bt殺蟲(chóng)蛋白作為抗原免疫白兔,獲得了高特異性的抗血清,再經(jīng)過(guò)硫酸銨沉淀和DEAE-52柱層析純化,提取出了較純的IgG.采用改良的過(guò)碘酸鈉法,用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記IgG制備出了克分子比為2、工作濃度為1:800的高質(zhì)量酶標(biāo)抗體.為建立高靈敏度的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法奠定了基礎(chǔ).三.比較了兩種載體上三種酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的靈敏度,初步建立起檢測(cè)Bt殺蟲(chóng)蛋白的高靈
4、敏度方法.在聚苯乙烯酶標(biāo)板上的測(cè)定結(jié)果表明:直接ELISA和夾心ELISA的靈敏度相同,都為0.94ng/孔,但直接ELISA中抗原濃度與OD值間的線性關(guān)系呈極顯著,夾心ELISA中抗原濃度與OD值間的線性關(guān)系呈顯著;間接ELISA的靈敏度較前兩者低,使用HRP-IgG的靈敏度為15ng/孔,抗原濃度與OD值間的線性關(guān)系呈顯著,使用AKP-IgG的靈敏度為3.75ng/孔,抗原濃度與OD值間的線性關(guān)系呈極顯著.在硝酸纖維素膜上的測(cè)定結(jié)果
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 對(duì)硫磷殘留的酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)的研究.pdf
- 轉(zhuǎn)Bt基因甘藍(lán)的抗蟲(chóng)性研究.pdf
- Bt蛋白酶聯(lián)免疫分析技術(shù)研究.pdf
- 諾龍酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究.pdf
- 轉(zhuǎn)Bt crylAh和crylIe基因抗蟲(chóng)玉米的研究.pdf
- aftb1酶聯(lián)免疫檢測(cè)閱讀
- 轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉抗蟲(chóng)性鑒定方法研究.pdf
- 轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉種子PCR檢測(cè)技術(shù)研究.pdf
- 去氫甲睪酮的酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)與方法研究.pdf
- 燕窩糖蛋白酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究.pdf
- 重金屬鉛酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究.pdf
- 重金屬汞酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究.pdf
- 轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)玉米對(duì)天敵昆蟲(chóng)的影響.pdf
- 糞腸球菌酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的建立.pdf
- 轉(zhuǎn)Bt-pta基因水稻后代分子檢測(cè)與抗蟲(chóng)性鑒定.pdf
- 轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉抗蟲(chóng)性研究與新品系篩選.pdf
- 52835.幾種浮游植物酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用
- 綠豆過(guò)敏原酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究.pdf
- 可去除選擇標(biāo)記的轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)玉米的研究.pdf
- 菌核凈的免疫檢測(cè)技術(shù)研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論