版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、<p><b> 本科畢業(yè)設(shè)計</b></p><p><b> ?。?0_ _屆)</b></p><p> 自制鰻弧菌卵黃抗體抑菌效果研究</p><p> 所在學(xué)院 </p><p> 專業(yè)班級 生物技
2、術(shù) </p><p> 學(xué)生姓名 學(xué)號 </p><p> 指導(dǎo)教師 職稱 </p><p> 完成日期 年 月 </p><p><b> 目錄</b>&l
3、t;/p><p><b> 1引言4</b></p><p> 2試驗材料及儀器4</p><p> 2.1試驗材料4</p><p> 2.2試驗儀器5</p><p><b> 3試驗方法5</b></p><p> 3
4、.1菌株處理5</p><p> 3.2體外抑菌實驗5</p><p> 3.3體內(nèi)抑菌實驗6</p><p> 4實驗結(jié)果與討論6</p><p> 4.1特異卵黃抗體對鰻弧菌的體外抑菌效果6</p><p> 4.2特異卵黃抗體對感染鰻弧菌的克氏原螯蝦的保護作用8</p>
5、;<p><b> 4.3討論9</b></p><p><b> 5小結(jié)10</b></p><p><b> 5.1結(jié)論10</b></p><p><b> 5.2展望10</b></p><p> 致謝錯誤
6、!未定義書簽。</p><p><b> 參考文獻12</b></p><p> 摘要: 目的:研究抗鰻弧菌(Vibrio anguillarum)雞卵黃抗體(IgY)的體內(nèi)、外抑菌效果。方法:分別將鰻弧菌高免卵黃抗體、普通卵黃抗體與2×103CFU/ml的鰻弧菌懸液等體積混合0、1小時后,對混合液中的活菌總數(shù)進行計數(shù)、比較,以測定IgY在體外的抑菌效
7、果;分別將鰻弧菌高免卵黃抗體、普通卵黃抗體、生理鹽水與1×108CFU/ml的鰻弧菌懸液等體積混合均勻后,注射入克氏原螯蝦體內(nèi),觀察其死亡情況,以測定其體內(nèi)抑菌效果。結(jié)果:實驗表明與普通卵黃抗體相比,鰻弧菌高免卵黃抗體與新鮮培養(yǎng)的活鰻弧菌菌液混合中和后,表現(xiàn)出了明顯的抑菌活性;注射特異性鰻弧菌卵黃抗體對感染鰻弧菌的小龍蝦具有明顯的保護作用,具體表現(xiàn)為延緩小龍蝦的死亡,以及降低死亡率,而普通卵黃抗體對其沒有作用。</p&g
8、t;<p> 關(guān)鍵詞: 鰻弧菌; 卵黃抗體;體內(nèi)抑菌;體外抑菌</p><p> ABSTRACT:Purpose: Research the bacteriostatic effect of anti-Vibrio anguillarum IgY in vitro and in vivo. Methods: To determine the bacteriostasis effect in v
9、itro, specific anti-Vibrio anguillarum IgY and nonspecific IgY were respectively mixed with 2×103CFU/ml bacterial suspension in equal-volume . 0 and1 hour later, the total number of living bacterium in the mixture w
10、ere counted and compared; To determine the bacteriostasis effect in vivo, specific anti-Vibrio anguillarum IgY, non-specific Ig</p><p> KEYWORDS:Vibrio anguillarum; IgY; bacteriostatic ; in vitro; in vivo &
11、lt;/p><p><b> 引言</b></p><p> 鰻弧菌(Virio anguallanim)是一種對水產(chǎn)魚類危害嚴(yán)重的細(xì)菌性病原,其傳播區(qū)域廣泛,能引起世界范圍內(nèi)的淡、海水魚類及其它養(yǎng)殖動物發(fā)生弧菌病,常給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失[1]。它還可通過食物鏈感染人類,使人發(fā)生較嚴(yán)重的疾病[2]。鰻弧菌的致病性與許多毒力因子有關(guān),包括由質(zhì)粒編碼的鐵吸收系統(tǒng)
12、、細(xì)胞外溶血毒素、細(xì)菌鞭毛蛋白、胞外蛋白酶等[3]。隨著我國養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展,由于水體生態(tài)環(huán)境惡化和水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的高密度人工養(yǎng)殖,使鰻弧菌引起的養(yǎng)殖魚、蝦類疾病發(fā)生狀況日趨嚴(yán)重,它能引起蝦類黃鰓病[4];感染大菱鲆,使其出現(xiàn)全身性的出血及敗血癥[5]; 引起牙鲆鰭部嚴(yán)重出血以及體表潰爛[6] 等病癥,發(fā)病嚴(yán)重時往往造成魚、蝦類的大批死亡,給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的沖擊。</p><p> 目前,養(yǎng)殖基層對魚、蝦類鰻
13、弧菌病的防治主要是使用抗生素。然而,抗生素雖有使用方便、見效快和療效好等優(yōu)點,但在實際生產(chǎn)中存在盲目使用和濫用藥物的現(xiàn)象,不僅破壞了生態(tài)環(huán)境的平衡,導(dǎo)致生物產(chǎn)生耐藥性,而且其殘留的藥物也會危及人類健康[7]。因此,探討其它的治療途徑是一種必然的研究趨勢。</p><p> 卵黃抗體(egg yolk antibodies, IgY)是存在于雞、鴨、鵝等蛋禽卵黃中的一種抗體,也稱卵黃免疫球蛋白(egg yolk
14、immunoglobulins, IgY)[8],是從特定抗原免疫禽類的禽蛋黃中提取、制備的具有高效價的抗體,具有均一性好,對熱、酸和堿穩(wěn)定性好等優(yōu)點[9] 。自1893年Klemperer首次報道雞蛋中存在抗體以來,卵黃抗體的研究不斷深入,目前在卵黃抗體的形成、生物學(xué)特性等方面已研究的比較清楚,并且卵黃抗體作為診斷試劑和防治藥物的研究愈來愈受到關(guān)注[10]。許多研究結(jié)果證實,特異性卵黃抗體用于預(yù)防和治療動物和人類的某些疾病有很好的效果
15、[11~17]。如[18]:張英等的研究發(fā)現(xiàn)小鵝瘟卵黃抗體對小鵝瘟的預(yù)防保護率為98.8%,治療有效率為95.2%;范文明等(1993)應(yīng)用鴨肝炎(DH)高免IgY治療DH,療效達90%以上;范文明等(1993)應(yīng)用混合抗原制備了雞傳染性法氏囊?。↖BD)高免IgY,對IBD的療效達90%以上。卵黃抗體用于人、畜、禽類疫病防治方面已有許多應(yīng)用于生產(chǎn)中,如用于緊急預(yù)防和治療傳染性法氏囊?。↖BD)、新城疫(ND)等疫病</p>
16、<p> 本研究的目的是借鑒陸生畜禽相關(guān)研究的成功經(jīng)驗,以純培養(yǎng)的鰻弧菌作為抗原,探討鰻弧菌IgY的抑菌效果,以期為鰻弧菌引起的疾病的生物防治工作奠定基礎(chǔ),創(chuàng)造社會、經(jīng)濟及生態(tài)效益。</p><p><b> 試驗材料及儀器</b></p><p><b> 試驗材料 </b></p><p> 鰻弧
17、菌(V. anguallanim)</p><p> 鰻弧菌菌種為實驗室中由香魚中分離、純化、鑒定后低溫保存的菌種(史雨紅老師提供)。菌種經(jīng)活化后, 28 ℃下、振蕩培養(yǎng)過夜后即得實驗所用菌懸液。</p><p><b> 抗鰻弧菌卵黃抗體</b></p><p> 實驗室自制(由慈溪益大養(yǎng)殖廠購得200d的齡產(chǎn)蛋雞,于第三次免疫后10天
18、收集的雞蛋經(jīng)過卵黃分離、卵黃液稀釋、抗體沉淀、抗體透析等步驟,并經(jīng)過相關(guān)的效價檢測后得到實驗所需的卵黃抗體,低溫存放)。其效價為1:10240,濃度為80mg/L。</p><p><b> 普通卵黃抗體</b></p><p> 實驗室自制(未經(jīng)鰻弧菌免疫的雞蛋的雞蛋經(jīng)過卵黃分離、卵黃液稀釋、抗體沉淀、抗體透析等步驟,提取得到)。</p><
19、p><b> 克氏原螯蝦</b></p><p> 于菜市場購得的健康克氏原螯蝦, 實驗室暫養(yǎng)。</p><p><b> 培養(yǎng)基</b></p><p> LB培養(yǎng)基配制,酵母膏 5g,蛋白胨 10g,NaCl 10g 瓊脂 17g,加雙重水至 1000ml,調(diào)pH至7.2。固體培養(yǎng)基每升加 瓊脂 17g。
20、</p><p><b> 試驗儀器</b></p><p> 試管、燒杯、培養(yǎng)皿、磁力攪拌器、電子天平、pH計、高壓滅菌鍋、針式濾器(0.22um)、移液器、漩渦振蕩器、注射器(1 ml)、培養(yǎng)箱、離心機等。</p><p><b> 試驗方法</b></p><p><b>
21、菌株處理</b></p><p> 將低溫保存的菌種接種于LB液體培養(yǎng)基,于28℃,160r/min振蕩培養(yǎng)過夜,進行活化。將活化后的菌懸液按1:100比例稀釋后在28℃、振蕩培養(yǎng)7h。取培養(yǎng)的菌懸液100ul,加入裝有900ul的LB液體培養(yǎng)基EP管中充分混勻此為10-1稀釋液,以次類推制成10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8幾種稀釋度的菌懸液,取10-6、10-7
22、、10-8 三個稀釋度,分別取100ul涂布在LB固體培養(yǎng)基上,涂勻,置需氧條件下,28℃倒置培養(yǎng)24h后,菌落計數(shù)得到菌懸液的濃度[19]。期間菌懸液存放入4℃冰箱備用。</p><p><b> 體外抑菌實驗</b></p><p><b> 卵黃抗體的處理</b></p><p> 將實驗室自制的低溫保存的高免
23、蛋黃抗體和普通卵黃抗體充分溶化,然后經(jīng)0.22um無菌針式濾頭過濾后備用。</p><p><b> 菌懸液的處理</b></p><p> 取存于冰箱的菌懸液,根據(jù)其計數(shù)情況用LB液體培養(yǎng)基調(diào)整濃度至2×103CFU/ml,備用。</p><p><b> 體外抑菌實驗</b></p>&l
24、t;p> 本實驗方案借鑒謝獻勝等人描述的抗幽門螺旋桿菌卵黃抗體的體外抑菌試驗[20]方法,進行相應(yīng)簡化而來。其具體操作步驟如下。</p><p> 表1 體外抑菌實驗處理</p><p> Tab.1 Treatment in vitro antibacterial experiment </p><p> 取上述混合液各100ul培養(yǎng)液滴加到LB固
25、體培養(yǎng)基上,涂勻,置需氧條件下,28℃培養(yǎng)24h后,菌落計數(shù),并換算為活菌濃度(CFU/ml)。對比、分析各組結(jié)果。</p><p> 計算公式:每毫升樣品中活菌數(shù)=同一稀釋度3次重復(fù)的平均菌落數(shù)×10</p><p><b> 體內(nèi)抑菌實驗</b></p><p> 克氏原螯蝦的預(yù)感染實驗</p><p&g
26、t; 取2×108CFU/ml菌懸液在5000g離心約3 min后,棄去上清液,以0.9%生理鹽水重懸至相同濃度,混勻,備用。</p><p> 參考文獻[21],取4只克氏原螯蝦,在第3腹節(jié)肌肉處注射大約0.2ml/尾的鰻弧菌菌懸液,進針角度約15°,深度3-5mm,然后觀察其死亡情況[21]。</p><p><b> 中和試驗</b>&
27、lt;/p><p> (1)鰻弧菌及抗體的處理</p><p> 取三只試管分別做以下操作(表2),然后將試管內(nèi)混合液均混勻,備用。</p><p> 表2體內(nèi)抑菌實驗處理</p><p> Tab.2 Treatment in vivo antimicrobial experiments</p><p><
28、;b> ?。?)實驗處理</b></p><p> 取在實驗室暫養(yǎng)1周的試驗克氏原螯蝦27尾,隨機分為3組,Ⅰ組注射陽性組混合液,Ⅱ組注射陰性組混合液,Ⅲ組注射空白組混合液。實驗時,于蝦的倒數(shù)第3腹節(jié)淺層肌肉處注射感染健康的克氏原螯蝦,注射量0.2ml/尾。每天記錄克氏原螯蝦死亡的情況,并計算保護率。</p><p><b> 實驗結(jié)果與討論</b&g
29、t;</p><p> 特異卵黃抗體對鰻弧菌的體外抑菌效果</p><p> 由圖1可見,陽性組的菌落數(shù)量明顯比陰性組少。實驗結(jié)果表明,與普通卵黃蛋白液相比,高免卵黃抗體與新鮮培養(yǎng)的活鰻弧菌菌液混合后,表現(xiàn)出明顯的抑菌活性,在一定程度上抑制了鰻弧菌的生長和繁殖,而普通卵黃蛋白液無抑菌活性。</p><p> 由圖2可見,共孵育1h后,陽性組菌落數(shù)仍明顯少于陰性
30、組。結(jié)果表明,與新鮮培養(yǎng)的活鰻弧菌菌液混合孵育1h后,高免卵黃抗體仍能發(fā)揮其抑菌效果,抑制鰻弧菌的生長和繁殖。</p><p> 由圖3、4可見,高免卵黃抗體與新鮮培養(yǎng)的活鰻弧菌菌液孵育1h后菌落明顯較混合后立即計數(shù)多,這表明卵黃抗體的抑菌效果并沒有隨著孵育時間的延長而加強,而是隨著時間的延長有所減弱。</p><p> 圖1 直接混合后菌落的生長情況</p><p
31、> Fig. 1 The growth of colonies after directly mixing</p><p> 圖2混合液孵育1h后菌落的生長情況</p><p> Fig.2 The growth of colonies after the mixture incubation 1h</p><p> 圖3 直接混合后陽性組菌落
32、生長情況 圖4 孵育1h后陽性組菌落生長情況</p><p> Fig.3 The positive group growth of colonies Fig.4 The positive group growth of colonies</p><p> after directly mixing after the mi
33、xture incubation 1h</p><p> 特異卵黃抗體對感染鰻弧菌的克氏原螯蝦的保護作用</p><p> 鰻弧菌對克氏原螯蝦的感染</p><p> 通過實驗發(fā)現(xiàn)經(jīng)1×108CFU/ml鰻弧菌菌懸液注射兩天后的4只克氏原螯蝦都死亡。實驗結(jié)果表明鰻弧菌可以感染克氏原螯蝦,用于后續(xù)的體內(nèi)抑菌實驗。</p><p>
34、; 卵黃抗體的體內(nèi)抑菌作用</p><p> 如表3為注射實驗兩天后克氏原螯蝦的死亡情況,從表上可以看出只注射含鰻弧菌的空白對照組和注射含卵黃蛋白液的陰性對照組中的克氏原螯蝦在2天內(nèi)全部死亡,而注射含卵黃抗體的陽性對照組中有6尾存活,實驗結(jié)果表明,在克氏原螯蝦體內(nèi),注射鰻弧菌卵黃抗體對鰻弧菌有抑制作用,能在不同程度上的降低死亡率,對感染鰻弧菌的克氏原螯蝦有一定保護作用,能治療和預(yù)防克氏原螯蝦感染鰻弧菌,而卵黃
35、蛋白液對其沒有作用。在本試驗中,其免疫保護率為66.7%(表3)。</p><p> 表3 注射鰻弧菌卵黃抗體對克氏原螯蝦的免疫保護作用(2天)</p><p> Tab.3 The immune protection of injection experiment using anti-vibrio anguillarum IgY in crayfish(2day)</p>
36、;<p> 通過實驗的觀察發(fā)現(xiàn)陰性和空白組的克氏原螯蝦多集中在注射后第2天死亡,陽性的克氏原螯蝦則集中在注射后第3天死亡,注射7d后陽性組的克氏原螯蝦還有3只存活(表4)。這些結(jié)果表明,在注射后第二天鰻弧菌在克氏螯蝦體內(nèi)發(fā)生作用,并導(dǎo)致死亡,而卵黃抗體就在此期間發(fā)揮抑菌效果,具體表現(xiàn)為延緩及降低其死亡率。</p><p> 表4 注射鰻弧菌卵黃抗體對克氏原螯蝦的免疫保護作用(7天)</p&
37、gt;<p> Tab.4 The immune protection of injection experiment using anti-vibrio anguillarum IgY in crayfish(7day)</p><p><b> 討論</b></p><p><b> 體外抑菌實驗</b></p>
38、;<p> 本實驗中,由于菌落數(shù)量過多而無法進行較為準(zhǔn)確的計數(shù),直觀地反映鰻弧菌卵黃抗體的抑菌效果,故使用比較能清晰反映結(jié)果的照片描述實驗結(jié)果,并進行對比分析。</p><p> 據(jù)謝獻勝等報道的抗幽門螺旋桿菌卵黃抗體體外抑菌實驗中,其所用的特異性卵黃抗體能完全抑制細(xì)菌的生長[20];李曉華等報道的抗雞念珠菌卵黃抗體也完全抑制了雞念珠菌的生長和繁殖[23]。在本次實驗中并沒有達到完全抑菌效果,平
39、板中還有較多菌落生長,分析其原因可能有以下幾點:(1)在過濾低溫保溫的卵黃抗體溶液時,溶化不夠充分,使部分卵黃抗體的有效成分被微濾膜過濾掉,而影響卵黃抗體的作用效果;(2)每種特異性卵黃抗體只針對其特定的細(xì)菌起作用,那么本身性質(zhì)也應(yīng)該有所不同,這就導(dǎo)致其對細(xì)菌的抑制程度也會有差異,如在隋建新等報道的單增李斯特菌雞卵黃抗體的抑菌活性研究中,其所用特異性卵黃抗體的抑制效果約50%[24];(3)抗體在與鰻弧菌進行中和時,存在著一定的量效關(guān)系
40、,即抗體與抗原的劑量呈一定的比例關(guān)系時,才能夠發(fā)生較完全的中和反應(yīng)[25],可能是實驗中加入的卵黃抗體太少,無法中和所有的鰻弧菌,導(dǎo)致其抑菌效果不佳;(4)卵黃抗體與鰻弧菌共孵育的時間太短,無法使卵黃抗體與鰻弧菌充分起作用,而達到完全抑制效果。</p><p> 另外,在組間分析時,發(fā)現(xiàn)卵黃抗體的抑菌效果并沒有隨著孵育時間的延長而加強,而是隨著時間的延長有所減弱。但有關(guān)文獻指出[26],卵黃抗體的抑菌活性會隨孵
41、育時間的延長而加強,而孵育初期通常沒有變化,分析其原因可能有以下幾點:(1)本次IgY的體外抑菌實驗,主要是在液態(tài)培養(yǎng)體系下進行,在液態(tài)培養(yǎng)過程中IgY與抗原菌之間的凝集效應(yīng)可能會影響到菌懸液的均勻性[27],進而影響涂布時的準(zhǔn)確性,產(chǎn)生干擾,導(dǎo)致實驗結(jié)果有所偏差;(2)與卵黃抗體本身的性質(zhì)也有關(guān)系,每種卵黃抗體效價都有所不一,其發(fā)揮抑菌效果的劑量也都不一樣;(3)本實驗中將卵黃抗體與鰻弧菌于28℃共孵育1小時后,抑菌效果稍有下降,可能
42、是由于卵黃抗體低濃度、非低溫狀態(tài)下部分降解失活。</p><p><b> 體內(nèi)抑菌效果</b></p><p> 為測試高免卵黃抗體在動物體內(nèi)的抑菌效果,需選擇適合的動物進行實驗。由于本次實驗是在實驗室進行的,所以實驗動物的選擇非常重要,首先它必須對鰻弧菌有可感性,即能感染鰻弧菌并導(dǎo)致病變死亡;其次該動物對環(huán)境要求不能太高,就算是在實驗室環(huán)境下也能存活;最后也要
43、符合實際的人力、物力、財力情況。通過文獻等多方面查找發(fā)現(xiàn)克氏原螯蝦是一種很理想的實驗動物模型??耸显r是一種存活于淡水中像龍蝦的甲殼類動物,適用淡水養(yǎng)殖,價格便宜,耐受力強,對食物要求少,耐饑餓力強,其生存能力非常強,容易在實驗室飼養(yǎng)、管理[21],適合于本研究后期去驗證自制特異性抗鰻弧菌卵黃抗體的體內(nèi)免疫效果。但是經(jīng)查找目前并沒有關(guān)于鰻弧菌對克氏原螯蝦侵染實驗的報道,所以需對克氏原螯蝦進行預(yù)感染實驗,以測試鰻弧菌對克氏原螯蝦是否具有
44、致病性。</p><p> 實驗中注射后第二天陰性和空白組的克氏原螯蝦就全部死亡,而陽性組的克氏原螯蝦也有少量死亡。而據(jù)盧亞楠文獻中報道[22] ,其實驗動物對蝦在注射感染鰻弧菌3~4天后只是行動緩慢,進食量減少,7天左右才導(dǎo)致死亡,其陽性組的死亡率在15%左右。雖然文獻報道對蝦與本次實驗所用的克氏原螯蝦在各方面有所不同,但是可以作為體外抑菌實驗中動物死亡速度與死亡率方面的一個參考。經(jīng)對比可以發(fā)現(xiàn),本次實驗動物
45、克氏原螯蝦的死亡速度很快,集中在注射感染后的第3天死亡,7天內(nèi)其陽性組的死亡率就到達了66.7%,明顯偏高。這樣造成實驗結(jié)果不夠準(zhǔn)確,且卵黃抗體在克氏原螯蝦體內(nèi)對感染鰻弧菌的作用效果無法從克氏原螯蝦的外部表現(xiàn)中觀察到,以及由于作用時間太短也可能無法使卵黃抗體在蝦體內(nèi)發(fā)揮最大作用。分析造成克氏原螯蝦提前死亡的原因可能是注射混合液時,鰻弧菌的濃度太高,導(dǎo)致克氏原螯蝦快速死亡,而鰻弧菌濃度過高,也使陽性組的卵黃抗體無法完全與鰻弧菌中和,最終使
46、沒有中和的鰻弧菌感染了克氏原螯蝦。本次實驗是以等體積的鰻弧菌與卵黃抗體混合后一次性注射的,當(dāng)藥物進入機體后要經(jīng)過機體的吸收、分布、生物轉(zhuǎn)化以及排泄,而僅有一部分藥物發(fā)揮藥理學(xué)</p><p><b> 小結(jié)</b></p><p><b> 結(jié)論</b></p><p> 本次實驗中利用普通卵黃抗體與經(jīng)特異性免疫的高
47、免鰻弧菌卵黃抗體進行對比實驗,驗證了自制的鰻弧菌卵黃抗體對鰻弧菌有較強的抑制效果,它不僅能在體外起作用,而且能保護鰻弧菌敏感宿主克氏原螯蝦,表現(xiàn)為延緩、降低鰻弧菌對克氏原螯蝦的致死效應(yīng)。</p><p><b> 展望</b></p><p> IgY作為一種天然生物活性物質(zhì),己成功用于多種病原體的防治。目前,已有許多關(guān)于其抑菌效果的報道研究,如隋建新等成功制備了
48、單增李斯特菌(Listeria monocytogens)雞卵黃抗體,并通過體外抑菌實驗證明其有顯著抑菌活性[24];陳強等研究了卵黃抗體在防治中華鱉氣單胞菌病中的應(yīng)用,得出其具有良好的防治效果[27]等。實驗證明卵黃抗體是一種理想的預(yù)防和治療用抗體,其抑菌效果顯著。與常用的哺乳動物血清中的免疫球蛋白(immunoglobulin,IgG)相比,IgY又具有許多顯著的優(yōu)勢:雞蛋產(chǎn)量大,制備方便,IgY的價格相對便宜;提取自天然產(chǎn)物,不存
49、在宰殺動物而導(dǎo)致的動物福利和倫理問題;IgY的性質(zhì)相對IgG更加穩(wěn)定,便于保存和應(yīng)用[28]。水產(chǎn)動物抗細(xì)菌特異性IgY的研究是一個正在發(fā)展而又非常具有應(yīng)用前景的研究方向[29]。</p><p> 本研究初步考察了自制的抗鰻弧菌特異性IgY的抑菌效果,實驗表明其具有非常重要的研究開發(fā)價值,有望作為天然生物抑菌劑應(yīng)用于生物體以及動物性食品中預(yù)防和控制關(guān)于鰻弧菌疾病。總而言之,本次實驗為尋求一條真正有效的防治水產(chǎn)
50、動物鰻弧菌病的手段莫定了一定的基礎(chǔ)。</p><p> 但是從本次實驗也發(fā)現(xiàn)許多因素影響可能影響卵黃抗體抑菌效果的發(fā)揮,為此,在以后的實驗中,還需對實驗的一些條件進行優(yōu)化,以期達到卵黃抗體發(fā)揮抑菌作用的最佳效果。</p><p><b> 體外抑菌實驗的優(yōu)化</b></p><p> ?。?)基于上述結(jié)果的分析,為確保卵黃抗體能發(fā)揮其最大抑
51、菌效果,在續(xù)研究中,可于4℃,將卵黃抗體與鰻弧菌共孵育不同時間后檢測其抑菌效果。</p><p> ?。?)本次實驗IgY的體外抑菌實驗主要是在液態(tài)培養(yǎng)體系下進行,但是抗體用于抑制飼料、肉制品、水產(chǎn)品等固態(tài)原料中的致病菌時,主要以噴灑或者浸泡的方式分布于原料表面并進而發(fā)揮作用,液態(tài)培養(yǎng)條件下的實驗結(jié)果與其實際性能之間可能存在較大的偏差[24]。為了更為準(zhǔn)確地模擬IgY在以上生物體系中的作用方式并判斷其抑菌效果,可
52、以在實驗中設(shè)計固態(tài)培養(yǎng)基表面涂布特異性卵黃抗體后的抑菌試驗,來測試其抑菌效果。</p><p> (3)本次實驗證明了卵黃抗體明顯的抑菌效果,在今后實驗中可以設(shè)計正交試驗,通過濃度、酸堿度、孵育時間等因素對卵黃抗體的發(fā)揮抑菌活性的影響,刪選出最優(yōu)的反應(yīng)體系,為以后投入商品化生產(chǎn)做參考。</p><p><b> 體內(nèi)抑菌實驗的優(yōu)化</b></p>&
53、lt;p> ?。?)克氏原螯蝦體內(nèi)抑菌實驗時每組只使用了9尾龍蝦,并不是非常準(zhǔn)確,在以后的實驗中可以相應(yīng)得增加試驗克氏原螯蝦的數(shù)量以提高實驗的準(zhǔn)確性與說服力。</p><p> ?。?)在對克氏原螯蝦的體內(nèi)抑菌效果研究方面,還不夠全面,有文獻上指出[22]可以對克氏原螯蝦進行投喂和浸泡實驗來測試軟黃抗體對克氏原螯蝦的治療效果。雖然直接注射IgY效果最為直接,但是IgY的注射在大批量養(yǎng)殖過程中實施起來較為困難
54、,而投喂、浸泡處理方法則簡單可行,尤其是投喂保護方法可行性最大,并且有關(guān)資料表明其效果明顯[22]。后續(xù)研究將對其進行改進:注射后每天投喂混合卵黃體抗體的飼料,甚至為了與生產(chǎn)實際結(jié)合,全部采用連續(xù)投喂卵黃抗體法進行體內(nèi)保護實驗。</p><p> (3)就如前面所說體外抑菌與體內(nèi)抑菌是不同的,他們之間所需的劑量也會不同,所以可以在以后的實驗中設(shè)計實驗來探討卵黃抗體使用的最佳劑量。</p><
55、p> ?。?)由于本次實驗條件的限制,只對克氏原螯蝦一種實驗動物進行了體內(nèi)抑菌實驗,而鰻弧菌在其他水產(chǎn)養(yǎng)殖動物中是否具有抑菌效果還需在以后的實驗中加以證實。</p><p><b> 參考文獻</b></p><p> Egidius E.Vibriosis,pathogenicity and pathology, a renew[J].Aquacultur
56、e,1987,(67):15~18.</p><p> Toranzo AB,Santos Y,Barja J I.Immunization with bacterial antigens:vibrio infe ctions [J].Dev Biol Stand, 1997,(90):93~105.</p><p> 王雪,安利國,袁金鐸.鰻弧菌鐵吸收系統(tǒng)的毒力作用研究進展[J].水
57、產(chǎn)科學(xué),2006,25(3):161~162.</p><p> 蘇永騰,劉波,周群蘭等. 大黃蒽醌提取物對羅氏沼蝦抗鰻弧菌感染的研究[J].水產(chǎn)學(xué)報,2008,32(3):455~462.</p><p> Miquel P.,Mette H.,Lone G.,et al.Probiotic effect in vivo of Roseobacter strain 27-4 agai
58、nst Vibrio (Listonella) anguillarum infections in turbot (Scophthalmus maximus L.) larvae [J].Aquaculture,2006,(255): 323–333.</p><p> 夏永娟,黃威權(quán),姜國良.鰻弧菌感染牙鲆的組織學(xué)及組織化學(xué)觀察.海洋科學(xué),2000,24(10):41~44.</p><p
59、> 楊少麗,王印庚,董樹剛.海水養(yǎng)殖魚類弧菌病的研究進展[J]. 海洋水產(chǎn)研究,2005,26(4):75~82.</p><p> 穆海波,王洪新.卵黃球蛋白lgY的提純及應(yīng)用研究進展[J].中國家禽,2002,24 (20):35~37</p><p> 陳斌,楊志華.雞卵黃免疫球蛋白( IgY)的作用機理及應(yīng)用前景[J].浙江畜牧獸醫(yī), 2005,30(1): 9~10.
60、</p><p> 鄭立勇,喬彥良,馬鳳龍等.卵黃抗體不同提取方法的比較[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2009,(1):106~107.</p><p> 王剛,呂殿紅.卵黃抗體應(yīng)用研究進展[J].動物醫(yī)學(xué)進展,2002,23(1):16~17.</p><p> Hoon H Sunwoo,Welson W Wang,Jeong S Sim.Detection o
61、f Escherichia coliO157 H7 using chicken immunoglobulin Y [J].Immunology Letters,2006,(106):191~193.</p><p> Yu Hong Zhen,Li Ji,Jie Guo,et al.Characterization of specific egg yolk immunoglobulin (IgY) agains
62、t mastitis-causing Escherichia coli[J]. Veterinary Microbiology.2008,(130):126–133.</p><p> Kim DK,Jang IK,Seo HC,et al.Shrimp protected from WSSV disease by treatment with egg yolk antibodies (IgY) against
63、 a truncated fusion protein derived from WSSV[J].Aquaculture,2004,(237):21~30.</p><p> El-Sayed Moustafa Ibrahim,AKM Shofiqur Rahman,Rie Isoda,et al.In vitroandin vivoeffectiveness of egg yolk antibody agai
64、nstCandida albicans(anti-CA IgY)[J].Vaccine,2008,(17):2073~2080.</p><p> Jiang JP,Zhou J,Chen J,et al.Effect of chicken egg yolk antibody against adipose tissue plasma membranes on carcass composition and l
65、ipogenic hormones and enzymes in pigs.Livestock Science,2007,(107):235~243.</p><p> 王宇.抗奶牛乳腺炎特異性卵黃抗體的制備及活性研究[D],大連:大連理工大學(xué),2006.</p><p> Ra jeev,K J,Xu Z R,Shen J,et al.The efficacy of recombin
66、ant vaccines against white spot syndrome virus in Procambarus clarkii[J].Immunology Letters,2006,(105):68~76.</p><p> 沈萍,陳向東等.微生物學(xué)實驗[M].第四版.北京:高等教育出版社,2007:28~34.</p><p> 謝獻勝,王峰,周新民等.抗幽門螺旋桿菌卵黃
67、抗體的制備及其體外抑菌試驗[J].中國農(nóng)禽,2005,27(13):13~17.</p><p> 孔凡駿,周凱,鄭國興.三種弧菌對池養(yǎng)中國對蝦的急性致死劑量試驗[J].海洋科學(xué),1998,10(4): 6~7.</p><p> 盧亞楠,抗對蝦白斑綜合癥病毒特異性卵黃杭體的制備及其保護作用的研究[D].大連:大連理工大學(xué), 2009.</p><p> 李曉
68、華,楊小燕,戴愛玲,抗雞念珠菌卵黃抗體的研制及應(yīng)用[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2006,35(6):628~631.</p><p> 隋建新,林洪,曹立民等.單增李斯特菌(Listeria monocytogens)雞卵黃抗體的制備及其抑菌活性研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2009,35(2):1~6.</p><p> 宋宏新,高棟,薛海燕.卵黃免疫球蛋白的分離提取與鑒定
69、[J].食品科技,2003,(5): 99~101.</p><p> 肯業(yè)夫,林洪,張茜等.冷藏牙坪中主要腐敗菌卵黃抗體的抑菌性能[J].食品科學(xué),2010,31(23):109~113.</p><p> 陳強,周建武,饒平凡等.卵黃抗體在防治中華鱉氣單胞菌病中的應(yīng)用[J].福州大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2001,29(5):115~118.</p><p>
70、 Sherie L Morrison,Mansoor S Mohammed,Letitia A Wims,et al.Sequences in antibody molecules important for receptor-mediated transport into the chicken egg yolk [J].Molecular Immunology,2001,(38): 619~625.</p><
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 自制鰻弧菌卵黃抗體抑菌效果研究【開題報告】
- 自制鰻弧菌卵黃抗體抑菌效果研究【開題報告+文獻綜述+畢業(yè)設(shè)計】
- 鰻弧菌卵黃抗體的制備【畢業(yè)設(shè)計】
- 鰻弧菌卵黃抗體的制備【開題報告+文獻綜述+畢業(yè)設(shè)計】
- 鰻弧菌卵黃抗體的制備【開題報告】
- 冷藏牙鲆中主要腐敗菌卵黃抗體的制備及其抑菌性能研究.pdf
- 抗鰻利斯頓氏菌雞卵黃抗體對致病香魚保護作用的研究.pdf
- 單增李斯特菌雞卵黃抗體的抑菌性能及其機理研究.pdf
- 費菜提取液抑菌效果和抗氧化研究【畢業(yè)設(shè)計】
- 鰻弧菌研究概況【文獻綜述】
- 天然紅色素抑菌活性研究[畢業(yè)設(shè)計]
- 抗鰻弧菌獨特型單克隆抗體的研制.pdf
- 費菜提取液抑菌效果和抗氧化研究【開題報告+文獻綜述+畢業(yè)設(shè)計】
- 一株弧菌拮抗菌的鑒定、抑菌特性及應(yīng)用效果的初步研究.pdf
- 特異性卵黃抗體對燦爛弧菌感染仿刺參的保護作用研究.pdf
- 腐敗希瓦氏菌卵黃抗體抑菌作用方式的研究.pdf
- 果葡糖漿抑菌效果的研究.pdf
- 生物科學(xué)畢業(yè)論文株海洋來源株抗鰻弧菌細(xì)菌素生產(chǎn)菌的鑒定
- 幾種天然食用成分對副溶血性弧菌的協(xié)同抑菌效果及其損傷機理.pdf
- 病原鰻弧菌主要生物學(xué)性狀研究.pdf
評論
0/150
提交評論