企鵝珍珠貝Creb基因克隆分析及黑色素合成抑制劑和增強劑對幼貝生長性狀影響的研究.pdf

1、企鵝珍珠貝是培育優(yōu)質海水珍珠的大型育珠母貝，外殼一致的黑色，其黑色素的表達水平可影響珍珠質的色澤，進而影響珍珠質量。本研究首次半定量分析了黑色素合成相關基因Tyr，Creb，Cdk2，Pax3，Sox10，Bcl-2在企鵝珍珠貝各組織中的表達，克隆了企鵝珍珠貝Creb基因cDNA序列全長，初步研究了黑色素合成的增強劑和抑制劑對企鵝珍珠貝生長性狀的影響，結果如下:
　　1、采用半定量分析技術初步研究了黑色素合成通路中的調控基因Tyr

2、，Creb，Cdk2，Pax3，Sox10，Bcl-2在企鵝珍珠貝外套膜、鰓、閉殼肌、消化盲囊、足、精巢、卵巢7個組織中的表達。半定量結果顯示:Tyr基因在外套膜和精巢中表達量最高，鰓、閉殼肌卵巢中也有表達，初步判定Tyr基因與珍珠層成色有關。Bcl-2在外套膜、閉殼肌、和精巢中高表達，消化盲囊和卵巢中沒有表達。Creb在各個組織中均有表達，但有差異，在消化盲囊、足、精巢和卵巢中表達量較高。Cdk2在消化盲囊和精巢中表達量較高，其他5個

3、組織中表達較低。Pax3只在足組織中表達，Sox10在鰓和消化盲囊中表達量較高，精巢和卵巢中有少量表達。
　　2、采用RACE-PCR技術首次從企鵝珍珠貝中克隆了Creb基因的全長cDNA序列:基因的cDNA全長為1484bp，開放閱讀框長為1071bp，編碼356個氨基酸。該基因的氨基酸序列中有一個bZIP結構域位于278～341氨基酸殘基處，存在4個蛋白結合位點，分別在1，253～254，273，356氨基酸殘基處，1個多聚核

4、苷酸結合位點，位于296氨基酸處。企鵝珍珠貝的Creb與太平洋牡蠣（Crassostrea gigas）、近江牡蠣（Crassostrea ariakensis）、歐洲牡蠣（Ostrea edulis）氨基酸序列的同源性分別為46％、45％、46％;與其它軟體動物如靜水椎實螺（Lymnaea stagnalis）、海兔(Aplysiacalifornica)光滑雙臍螺（Biomphalaria glabrata）的同源性分別是50％、3

5、3％、30％。
　　3、不同濃度的黑色素合成抑制劑熊果苷和增強劑丙戊酸分別處理1月齡的企鵝珍珠貝幼貝，處理不同時間后，在實驗室養(yǎng)殖，觀察其殼色的變化，同時分析處理方式對企鵝珍珠貝的殼長(SL)、殼高(SH)、殼寬(SW)的影響。結果發(fā)現(xiàn):不同濃度和不同處理時間的熊果苷處理組的幼貝殼長、殼高、殼寬三個指標增長顯著高于對照組，丙戊酸處理組略高于對照組;處理組和對照組幼貝前90天和前150天SL、SH、SW增長較快，但在養(yǎng)殖5個月后即1