蘆薈苷的提取分離研究

1、<p><b>　　一、蘆薈簡介</b></p><p>　　蘆薈屬百合科多年生常綠肉質(zhì)植物，是大自然賜予人類的仙丹草。這種植物頗受大眾喜愛，主要因其易于栽種，為花葉兼?zhèn)涞挠^賞植物。更兼含有多種有效成分，具有極高的藥用價(jià)值，顯得倍受研究者們的青睞。</p><p><b>　　1、種屬名稱</b></p><p>

2、;　　科中文名：獨(dú)尾草科 Asphodelaceae 　　</p><p>　　屬中文名：蘆薈屬 (Aloe) </p><p>　　別 名：盧會(huì)、訥會(huì)、象膽、奴會(huì)、勞偉</p><p>　　英 文 名：Aloes</p><p>　　現(xiàn)存蘆薈有三百多個(gè)品種，被廣為利用的主要有庫拉索蘆薈( A loe vera L ) 、木立蘆薈( A .

3、arborescens ) 、好望角蘆薈( A . ferox Mill ) 、開普蘆薈( A . af ricana ) ，被民間少量應(yīng)用的有皂質(zhì)蘆薈( A . saponaria ) 、中華蘆薈( A . varavia ) 、不夜城蘆薈( A . nobilis )等。</p><p><b>　　2、產(chǎn)地</b></p><p>　　蘆薈原產(chǎn)于地中海、非洲，為

4、獨(dú)尾草科多年生草本植物蘆薈本是熱帶植物，生性畏寒，但也好種活。據(jù)考證的野生蘆薈品種300多種，主要分布于非洲等地，后傳入美洲。</p><p><b>　　3、植物形態(tài)</b></p><p>　　一般蘆薈為常綠、多肉質(zhì)的草本植物。葉簇生，呈座狀或生于莖頂，葉常披針形或葉短寬，邊緣有尖齒狀刺。花序?yàn)閭阈?、總狀、穗狀、圓錐形等，色呈紅、黃或具赤色斑點(diǎn)，花瓣六片、雌蕊六枚

5、?；ū换慷噙B合成筒狀。</p><p><b>　　4、包含成分</b></p><p>　　蘆薈含有多化學(xué)成分，蒽醌類化合物是蘆薈有機(jī)活性成分中的最主要部分。主要有蘆薈大黃素（Aloeemodin）、蘆薈大黃素甙（Aloin, Barbaloin）蘆薈大黃素甙的異構(gòu)體異蘆薈大黃素苷（Isobarbaloin）、高塔爾蘆薈素（Homonataloin）、大黃酚（Ch

6、rysophanol）、大黃酚葡萄糖苷（Chrysophanol glucoside）、蒽酚（Anthranol）等化合物。</p><p><b>　　5、藥用價(jià)值</b></p><p>　　蘆薈作為一種天然藥用植物,已經(jīng)擁有幾千年的發(fā)展歷史。尤其在最近幾十年,國外對蘆薈的研究和開發(fā)速度大大加快。其應(yīng)用范圍不僅局限于初級(jí)的護(hù)膚保濕化妝品、洗滌用品、保健食品、飲料、

7、茶等范圍,而且已涉入到醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。對人體免疫力的提高、各種胃腸消化道潰瘍、便秘、糖尿病、腦心血管疾病、婦科病、皮膚病及一些疑難病癥都有明顯療效。近幾年,科學(xué)家又發(fā)現(xiàn)其具有抗癌作用而且對艾滋病有一定的療效,國際醫(yī)學(xué)論文已發(fā)表很多。</p><p><b>　　二、 蘆薈苷簡介</b></p><p><b>　　中文名:蘆薈苷</b></p&g

8、t;<p>　　別名：蘆薈素、蘆薈大黃素苷、蘆薈甙</p><p>　　化學(xué)名：Aloin； Barbaloin；</p><p>　　1,8-Dihydroxy-10-(beta-D-glucopyranosyl)-3-(hydroxymethyl)-9(10H)-anthracenone； 　　10-beta-D-Glucopyranosyl-1,8-dihydroxy

9、-3-(hydroxymethyl)-9(10H)-anthracenone</p><p><b>　　理化性質(zhì)：</b></p><p>　　蘆薈苷為黃色或淡黃色結(jié)晶粉末。</p><p>　　熔點(diǎn):148～149℃(乙醇)，一水合物熔點(diǎn)70～80℃。</p><p>　　[α]D+21°(水),[α]D-

10、8.3°。</p><p>　　略帶沉香氣味,味苦,易溶于吡啶,溶于冰醋酸,甲酸,丙酮,醋酸甲酯,以及乙醇等，易溶于水。</p><p>　　化學(xué)式：C21H22O9</p><p>　　分子量：418.40</p><p>　　蘆薈大黃素甙是蘆薈最基本的成分之一,它在蘆薈中大量存在,不很苦,有致瀉作用,但致瀉性較弱,只有當(dāng)蘆薈大黃

11、素苷被氧化后,即轉(zhuǎn)化為蘆薈大黃素時(shí),不但其苦味增加,而且致瀉功能也明顯增強(qiáng)。蘆薈苷是在人體內(nèi)寄生菌作用下，水解為蘆薈大黃素，這種蘆薈大黃素，刺激腸壁蠕動(dòng)，而對小腸無影響,同時(shí)由</p><p>　　于透壓改變，有利于腸道內(nèi)廢物排除，從而達(dá)到刺激性緩瀉，這種刺激瀉下作用對便秘和痔瘡有特殊療效。</p><p>　　三、蘆薈中蘆薈苷的提取</p><p>　　常用的提取

12、方法有兩相水解法、親脂性有機(jī)溶劑提取法、超臨界萃取法等。</p><p><b>　　總體思路如下：</b></p><p>　　蘆薈 →風(fēng)干粉碎 →氯仿回流 →熱過濾 →殘?jiān)L(fēng)干 →95%乙醇回流洗滌 →成鹽 →加堿（堿溶酸沉）→沉淀 → 蒽醌化合物 →分離 →蘆薈苷</p><p><b>　　1、蘆薈苷的檢驗(yàn)</b>

13、</p><p>　?。?）Feigl反應(yīng)：取精制蘆薈苷的水溶液1滴,加入25%碳酸鈉水溶液、4%甲醛溶液及5%鄰二硝基苯溶液各1滴,混合后置水浴上加熱,于1-4 min內(nèi)產(chǎn)生顯著紫色。</p><p>　?。?）Borntragers反應(yīng)：取精制蘆薈苷晶體,加10%硫酸溶液5 mL,置水浴上加熱2-10min,放冷后,加乙醚2mL振搖,靜置后分取醚層溶液,加入5%氫氧化鈉水溶液1mL,振

14、搖,醚層由黃色褪為無色,水層顯紅色。</p><p>　?。?）硼砂反應(yīng)：取蘆薈苷水溶液5mL,加硼砂0.2g,加熱溶解,取溶液數(shù)滴,加入蒸餾水10mL,水中可見綠色熒光。</p><p>　　（4）薄層色譜檢驗(yàn)：取樣品粉末0.5g，加甲醇20ml，置水浴加熱到沸，振搖數(shù)分鐘，濾過，濾液作供試液；另取蘆薈苷加甲醇制成每1ml含5mg的溶液，作對照品溶液，分別點(diǎn)樣于同一硅膠G薄板上，以醋酸乙

15、酯-甲醇-水（100：17：13）展開，取出晾干，噴以10%氫氧化鉀醇溶液，置紫色光燈（365nm）下檢視，供試液色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。</p><p><b>　　2、蘆薈苷的提取</b></p><p>　　本次試驗(yàn)介紹使用連續(xù)回流法提取蘆薈苷，通過此法提取的產(chǎn)物，數(shù)量有限，只能在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行小規(guī)模的提取，雖然過程稍顯復(fù)雜，但提取物含

16、量高，便于研究。</p><p>　　預(yù)處理：蘆薈葉片若干 →洗凈 →切片風(fēng)干 →粉碎 →粉末用5%醋酸酸化 →表面皿風(fēng)干</p><p><b>　　工藝流程：</b></p><p><b>　　蘆薈粗粉 </b></p><p><b>　　三氯甲烷回流2h</b><

17、;/p><p><b>　　震蕩，熱過濾</b></p><p>　　濾渣 濾液</p><p><b>　　揮發(fā)三氯化鐵</b></p><p>　　95%乙醇水浴回流4h，熱過濾</p><p>　　殘?jiān)?

18、 濾液</p><p><b>　　5%氫氧化鉀溶液</b></p><p><b>　　調(diào)節(jié)pH為9-10</b></p><p>　　靜置30min后過濾</p><p>　　沉淀 濾液</p><p><b>　　95%乙醇

19、洗滌3次</b></p><p><b>　　洗滌液</b></p><p><b>　　減壓濃縮</b></p><p><b>　　蒽醌苷的鉀鹽</b></p><p>　　95%乙醇，冰醋酸調(diào)節(jié)pH至中性</p><p><b&g

20、t;　　水浴加熱，熱抽慮</b></p><p>　　沉淀 濾液</p><p><b>　　濃縮</b></p><p><b>　　醋酸鉛試液</b></p><p><b>　　出現(xiàn)沉淀，過濾</b></p>

21、<p>　　沉淀 濾液</p><p><b>　　蒸餾水洗滌，過濾</b></p><p>　　殘?jiān)?濾液</p><p>　　1%氫氧化鈉調(diào)pH至中性</p><p><b>　　重結(jié)晶</b></p&g

22、t;<p><b>　　冰浴濾過</b></p><p><b>　　粗蘆薈苷晶體</b></p><p><b>　　具體說明：</b></p><p>　　將風(fēng)干后的蘆薈粉末，加三氯甲烷回流提取2h，振搖，趁熱過濾，殘?jiān)先燃淄閾]干。將殘?jiān)糜谒魇教崛∑髦?，?5%乙醇水浴回流提取

23、4 h，趁熱過濾，濾紙用95%乙醇洗滌3次，棄去濾渣，向?yàn)V液中緩慢加入5%氫氧化鉀溶液，用玻璃棒攪拌，同時(shí)調(diào)節(jié)pH值至9~10,靜置30 min后濾過，沉淀以95%乙醇洗滌3次，合并洗液，置真空干燥箱中，以0. 8MPa、60~70℃減壓濃縮至干，得總蒽醌苷的鉀鹽。</p><p>　　再加入95%乙醇，使沉淀懸浮于乙醇中，緩慢加入冰醋酸，調(diào)節(jié)pH值至中性，水浴加熱,趁熱抽濾，濾液濃縮，濃縮液加醋酸鉛試液，振搖混

24、勻，待沉淀不再繼續(xù)出現(xiàn)，濾過，沉淀以蒸餾水沖洗3次，過濾，濾液用1%氫氧化鈉調(diào)pH值至中性，重結(jié)晶，冰浴濾過，所得晶體為粗制蘆薈苷。</p><p><b>　　3、精制</b></p><p>　　將所得晶體溶解于70%甲醇中,溶液上Sephadex LH220凝膠柱層析,以70%甲醇洗脫,分段收集。所洗脫依次得到:蘆薈大黃素雙葡萄糖苷、大黃酚葡萄糖苷、蘆薈苷。后段

25、收集淡黃色結(jié)晶,減壓濃縮至干,即得到精制蘆薈苷結(jié)晶。</p><p>　　四、蘆薈苷的結(jié)構(gòu)分析</p><p><b>　　1、定性分析</b></p><p><b>　　（1）紫外光譜檢測</b></p><p>　　從蘆薈苷紫外光譜圖可知樣品蘆薈苷在297nm、356nm處有吸收峰與文獻(xiàn)【1】

26、基本一致。</p><p><b>　?。?）陰性干擾實(shí)驗(yàn)</b></p><p>　　分別取陰性對照品溶液、蘆薈苷對照品溶液、蘆薈苷樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀測定。結(jié)果陰性對照品溶液在乙醇蘆薈苷色譜峰相應(yīng)位置上無吸收峰出現(xiàn)，表明陰性對照無干擾。</p><p><b>　　2、定量分析</b></p>

27、;<p>　　采用HPLC法對蘆薈苷進(jìn)行含量測定，色譜條件為：流動(dòng)相甲醇—水—冰醋酸（42:58:0.5），流速1mL／min，檢測波長359nm，樣品溶液過 0.45μL微孔濾膜，進(jìn)樣10μL，用HPLC 法測定峰面積，外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算各個(gè)因素條件下的提取蘆薈苷的百分含量（提取率）。</p><p>　　將粗提取晶體溶解于70%甲醇中,溶液上Sephadex LH220凝膠柱層析,以70%甲醇洗脫,

28、分段收集。后段淡黃色晶體即為蘆薈苷，將該色帶刮下來，置三角瓶中，用乙醇洗至硅膠粉無色為止，然后將乙醇液濃縮至一定體積，備用。</p><p>　　3、單因素對提取率的影響</p><p>　?。?）乙醇濃度對提取率的影響</p><p>　　選擇適當(dāng)?shù)娜軇χ兴幱行С煞值奶崛∈呛苤匾?，最常用的溶劑是水和乙醇。在料液比?1:10，提取1次，提取時(shí)間60min，考察

29、不同乙醇濃度對蘆薈苷的提取率影響，結(jié)果如圖</p><p>　　由此可知，蘆薈苷的提取率都隨乙醇濃度的升高而有所增加。在50％乙醇濃度時(shí)達(dá)到最高，但在40％～60％內(nèi)變化不大，乙醇濃度60％～70％時(shí)提取率下降較快，因此選擇乙醇濃度為40％～60％。</p><p>　?。?）料液比對提取效果的影響</p><p>　　固定乙醇濃度50％，提取1次，提取時(shí)間60mi

30、n，考察不同料液比對蘆薈苷提取率的影響，結(jié)果如圖</p><p>　　隨著溶劑量的增加，蘆薈苷的提取率升高，溶劑量超過15倍量時(shí)溶劑量增加而提取率提高不多。</p><p>　　（3）提取時(shí)間對提取率的影響</p><p>　　固定溶劑50％乙醇，料液比1:10，回流提取1次，考察不同提取時(shí)間對提取率的影響，結(jié)果如圖</p><p>　　可知

31、，蘆薈苷在 60min 左右提取率達(dá)到最大，超過60min蘆薈苷含量反而下降，提取時(shí)間增大可能使蘆薈苷受到破壞。</p><p>　?。?）提取次數(shù)對提取效果的影響</p><p>　　多次提取有利于植物體中天然物的提取。在固定乙醇濃度 50％，料液比 1:10，提取時(shí)間 60min，考察不同提取次數(shù)對提取效果的影響，結(jié)果如圖</p><p>　　可知，提取次數(shù)的增

32、加，蘆薈苷的提取率增加，提取2次蘆薈苷含量最高，超過2次蘆薈苷提取率下降，提取次數(shù)以2次最佳。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1]陳金東,李蔚,李素云.高效液相色譜測定蘆薈膠囊中的蘆薈甙[J].色譜,2002,20(4):367-368</p><p>　　[2]萬金志，喬悅昕.蘆薈的化學(xué)成分及其研究[J]

33、.1990,0(2):51－153</p><p>　　[3]張翠利，李錕，李欽.蘆薈中蘆薈苷提取工藝研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2008,6(8)</p><p>　　[4]王書杰,肖金魚,王秀花.不同品種蘆薈中蘆薈苷的含量測定[J].藥物研究,2011,20(16)</p><p>　　[5]徐文廣,林佳,魏艷芬.蘆薈中蘆薈苷的提取分離[J].企業(yè)技術(shù)開發(fā)，201