三葉木通抗氧化酶活性及葉綠素含量研究【畢業(yè)論文】

1、<p>　　本科畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))</p><p>　　論文題目：三葉木通抗氧化酶活性及葉綠素含量研究</p><p>　　所在學(xué)院 生物與環(huán)境學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí) 生物技術(shù) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) <

2、/p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 日</p><p><b>　　摘 要</b></p><p>　　本文以采自寧波江北慈城鎮(zhèn)湖心村種植的三葉木通為材料，研究了不同發(fā)育階段植株莖、葉的超氧化物歧化酶

3、（SOD）、多酚氧化酶（PPO）、過氧化氫酶（CAT）活性與葉綠素含量的變化情況。結(jié)果表明，隨著三葉木通的生長與發(fā)育，嫩葉、老葉、嫩莖、老莖的SOD活性在11月份達(dá)到最大，分別為15.323U、48.627U、46.216U、19.762U；PPO活性在10月份達(dá)到最大，分別為52.321U、53.201U、37.207U、25.712U；CAT活性10月份最大；嫩葉、老葉的葉綠素含量隨著時(shí)間持續(xù)增長，在11月份達(dá)到最大，分別為19.3

4、15mg/g、53.709mg/g；嫩莖、老莖則持續(xù)降低，11月份的含量分別為11.305mg/g、8.756mg/g。由此表明，不同發(fā)育階段三葉木通抗氧化酶活性與葉綠素含量變化較大，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為三葉木通高效栽培技術(shù)研究提供參考。</p><p>　　關(guān)鍵詞：三葉木通；不同發(fā)育階段；生理生化特性；影響</p><p><b>　　ABSTRACT</b></p&

5、gt;<p>　　This paper collected from Ningbo Jiangbei Cicheng Town Lake Village cul-tivated Akebia trifoliate as material, study the different developmental stages o-f plant stem, leaf antioxidant enzyme superoxide d

6、ismutase(SOD), polyphenol oxidase(PPO), catalase(CAT) activity and chlorophyll content change. The result-s show that, with the growth of Akebia trifoliate leaves, the old leaves, stems, old stem, the activity of SOD in

7、November to reach the maximum, respective-ly 15.323U, 48.627U, 46.216U, 19.7</p><p>　　Key words: Akebia; Different developmental stages; Physiological and biochemical characteristics; Impact</p><p

8、><b>　　1 前言</b></p><p>　　三葉木通廣泛分布在我國長江流域及其臨近省份[1]。為落葉木質(zhì)藤本，長達(dá)10米。莖、枝無毛，灰褐色。三出復(fù)葉，小葉卵圓形，長寬變化很大，先端鈍圓或具短尖，基部圓形，有時(shí)略呈心形，邊緣淺裂或呈波狀，葉柄細(xì)長，長6～8厘米，小葉3片，革質(zhì)，長3～7厘米，寬2～4厘米，上面略具光澤，下面粉灰色。春夏季開紫紅色花，雌雄異花同株，總狀花序腋生，長

9、約8～10厘米，總梗細(xì)長；雌花紫紅色，生于同一花序下部，有花1～3朵；雄花生于花序上部，淡紫色較小，約有20朵左右。果成熟于秋季，果實(shí)肉質(zhì)，漿果狀，長圓筒形，長約8厘米，直徑4厘米左右，紫紅色，果皮厚，果肉多汁，8～9月成熟后沿腹縫線開裂，故稱八月炸或八月瓜，味甜可食；種子多數(shù)呈橢圓形，棕色，長數(shù)毫米，是中藥，稱預(yù)知子。</p><p>　　研究報(bào)道，三葉木通具有較高的營養(yǎng)價(jià)值，其果肉含有17種氨基酸，以人體必需

10、的賴氨酸含量最高；銅、鋅、鐵、錳、硒、鉀的含量均高于蘋果和梨；維生素C的含量高達(dá)840mg/100g；并富含脂肪及豆甾醇、β-谷甾醇，β-D葡萄糖甙。</p><p>　　因其莖藤含有多種齊墩果酸及常春藤皂甙類三萜皂甙[2]，根中含有多種齊墩果酸類三萜皂甙，果皮含有多種阿江橄仁酸類三萜皂甙[3]，能全株入藥；其莖藤及果實(shí)入藥稱為木通、八月扎或預(yù)知子，有舒肝理氣、活血止痛、除煩利尿的作用，用于肝、胃氣痛、消化不良，

11、腰、脅痛、疝氣、痛經(jīng)、痢疾等疾病的治療[4]并有抗癌的功效[5]。在我國，用木通治病的民間單驗(yàn)方有122個(gè)，治療48種疾病[6]；用木通研制開發(fā)的中成藥制劑有53種[7,8]。</p><p>　　由于三葉木通具有上述獨(dú)特的食用和藥用價(jià)值，因此，該植物資源的利用前景十分誘人。但三葉木通野生資源稀少，人工栽培技術(shù)不夠理想，極大地限制了其開發(fā)與利用；同時(shí)也不利于三葉木通天然資源的保護(hù)。為了更好地建立三葉木通高效栽培技

12、術(shù)，了解不同發(fā)育階段主要生理生化特性是極其必要的。因此，開展三葉木通不同發(fā)育階段葉片與莖的抗氧化酶活性及葉綠素含量研究，對(duì)于明確三葉木通的主要生理生化特性具有重要理論意義，同時(shí)為開展三葉木通優(yōu)質(zhì)高效栽培技術(shù)研究提供參考依據(jù)，從而為實(shí)現(xiàn)三葉木通的商業(yè)化開發(fā)與利用打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。</p><p>　　本文是以三葉木通為材料，采用分光光度比色法研究了不同發(fā)育階段對(duì)三葉木通植株葉、莖主要生理生化特性（超氧化物歧化酶、多酚

13、氧化酶、過氧化氫酶活性及葉綠素含量）的影響，以明確三葉木通生長過程中的基本生物學(xué)特性，為下一步開展三葉木通高效栽培技術(shù)研究提供基礎(chǔ)性數(shù)據(jù)。</p><p><b>　　2 材料與方法</b></p><p>　　2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑</p><p>　　2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)采用的材料來自寧波

14、江北慈城鎮(zhèn)湖心村基地種植的三葉木通。</p><p>　　2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑</p><p>　　表1 實(shí)驗(yàn)試劑一覽表</p><p>　　2.1.3 主要儀器及設(shè)備</p><p>　　表2 主要儀器設(shè)備</p><p>　　2.1.4 其他用品</p><p>　　研缽、容量瓶（500

15、mL、250mL、100mL、50mL、25mL）、量筒（500mL、100mL、10mL）、燒杯（1L、500mL、100mL）、移液管（5mL、1mL、0.5mL）、移液槍、洗耳球、蒸餾水、手術(shù)剪刀、一次性手套、一次性橡膠手套。</p><p>　　2.1.5 主要試劑配制</p><p>　?。?）130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液：稱取1.9399gMet，用磷酸緩沖液定容至

16、100mL。</p><p>　?。?）750µmol/L氮藍(lán)四唑溶液（NBT）：稱取0.06133gNBT，用磷酸緩沖液定容至100mL，避光保存。</p><p>　?。?）100µmol/L EDTA-Na2溶液：稱取0.03721gEDTA-Na2，用磷酸緩沖液定容至1000mL。</p><p>　　（4）20µmol/L核黃

17、素溶液：稱取0.0753g核黃素，用蒸餾水定容至1000mL，避光保存。</p><p>　　（5）0.1mol/L鄰苯二酚溶液：稱取1.1011g鄰苯二酚，用蒸餾水定容至100mL。</p><p>　?。?）0.1mol/LH2O2溶液：市售30%H2O2大約等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68mL，稀釋至1000mL，用標(biāo)準(zhǔn)0.1mol/L高錳酸鉀溶液(在酸性條件下)

18、進(jìn)行標(biāo)定。</p><p><b>　　2.2 實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p>　　2.2.1 樣品的采集與預(yù)處理</p><p>　　試驗(yàn)于2011年進(jìn)行，以寧波江北三葉木通作為樣品，于9月，10月，11月的相同日期分別對(duì)江北三葉木通的葉、莖進(jìn)行采集。對(duì)新鮮植株分嫩葉、老葉、嫩莖、老莖進(jìn)行分裝并冷藏于-40℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?lt;/p&g

19、t;<p>　　2.2.2 主要生理生化特性測(cè)定</p><p>　　2.2.2.1 超氧化物歧化酶（SOD）活力</p><p>　　超氧化物歧化酶的活性采用氮藍(lán)四唑（NBT）光化還原法測(cè)定[9]。該方法依據(jù)超氧化物歧化酶抑制氮藍(lán)四唑在光下的還原作用來確定酶活性大小。在有氧化物質(zhì)存在下，核黃素可被光還原，被還原的核黃素在有氧條件下極易再氧化而產(chǎn)生超氧陰離子自由基，超氧陰離子

20、自由基可將氮藍(lán)四唑還原為藍(lán)色的甲腙，后者在560nm處有最大吸收峰。而SOD可清除超氧陰離子自由基，從而抑制了甲腙的形成，其抑制強(qiáng)度與酶活性再一定范圍內(nèi)成正比。于是光還原反應(yīng)后，反應(yīng)液藍(lán)色愈深，說明酶活性愈低，反之酶活性愈高。據(jù)此可以計(jì)算出酶活性大小。SOD活性單位是抑制氮藍(lán)四唑光化還原的50%為一個(gè)酶活性單位表示?？砂匆韵鹿接?jì)算SOD活性：</p><p>　　SOD總活性（酶單位/g鮮重）=（AO-AS）&

21、#215;VT/（AO×0.5×W×V1）</p><p>　　式中：AO為光照對(duì)照管的吸光度值；AS為樣品管的吸光度值；VT為樣液總體積（mL）；V1為測(cè)定時(shí)樣品用量（mL）；W為樣品的重量（g）。</p><p>　　酶液提?。喝∫呀?jīng)過預(yù)處理的樣品0.5g置于預(yù)冷的研缽中，加入5mL預(yù)冷的50mmol/L(pH7.8)磷酸緩沖液(分幾次加入)，在冰浴下研磨

22、成勻漿，10000r/min下離心10min(2~4℃)。上清液即為SOD粗提液。</p><p>　　顯色反應(yīng)：取5mL玻璃管（要求透明度好）7支，3支為測(cè)定管，3支為對(duì)照管，另外1支為空白對(duì)照。按下表3加入各種溶液：</p><p>　　表3 各溶液加入量</p><p>　　混勻后取一支對(duì)照管置暗處，其他各管于4000lx日光下反應(yīng)20min（要求各管受光情

23、況一致，溫度高時(shí)間縮短，溫度低時(shí)間延長）。SOD活性測(cè)定與計(jì)算：至反應(yīng)結(jié)束后，以不照光的對(duì)照管作空白，分別測(cè)定其他各管的吸光度并進(jìn)行SOD活性計(jì)算。</p><p>　　2.2.2.2 多酚氧化酶（PPO）活力</p><p>　　多酚氧化酶是一種含銅的氧化酶，常用鄰苯二酚(兒茶酚)通過比色法測(cè)量產(chǎn)物的形成，以此來測(cè)定多酚氧化酶的活力。本次測(cè)定參考蔡漢權(quán)等[10]關(guān)于橄欖材料中多酚氧化酶活

24、力的敘述測(cè)定方法進(jìn)行。</p><p>　　PPO活力（0.01A×min-1）=A×D/（0.01×t×a）</p><p>　　式中：A為反應(yīng)時(shí)間內(nèi)吸光度的變化值；D為稀釋倍數(shù)，即提取的總酶液為反應(yīng)系統(tǒng)內(nèi)酶液體積的倍數(shù)；t為反應(yīng)時(shí)間（min）；a是測(cè)定時(shí)酶液用量（mL）；W為樣品鮮重（g）。</p><p>　　酶液制備：

25、稱取已經(jīng)過預(yù)處理的樣品1.0g置于研缽中，加入0.5gPVP和10mL0.1mol/LpH6.5磷酸緩沖液，研磨成勻漿，濾液加入30%飽和度硫酸銨，離心除沉淀，上清液再加硫酸銨使達(dá)60%飽和度，離心收集沉淀。將所得沉淀溶于2~3mL0.01mol/LpH6.5磷酸緩沖液即為酶液，以上操作均在4℃下進(jìn)行。</p><p>　　酶活力的測(cè)定：在試管中加入2.0mL0.05mol/LpH5.5磷酸緩沖液，1.0mL0.

26、1ml/L鄰苯二酚，1.0mL酶液，迅速搖勻后于525nm波長處測(cè)定吸光值，然后倒入試管中，放入37℃恒溫水浴中保溫10min，加入2mL20%三氯乙酸終止反應(yīng)，離心取上清。于525nm波長處測(cè)定吸光值（以上實(shí)驗(yàn)均做3個(gè)平行）。</p><p>　　2.2.2.3 過氧化氫酶（CAT）活力</p><p>　　過氧化氫酶是一種血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過氧化氫分解為水和分子氧，在此過程中

27、起傳遞電子的作用，過氧化氫既是氧化劑又是還原劑。故可根據(jù)H2O2的消耗量或O2的生成量測(cè)定該酶活力大小。酶活性用每g鮮重樣品1min內(nèi)OD變化值表示：</p><p>　　CAT活性（A×g-1×min-1）=A×V/（W×a×t）</p><p>　　式中：A為反應(yīng)時(shí)間內(nèi)吸光度的變化值；V是提取酶液總量（mL）；a是測(cè)定時(shí)酶液用量（mL）

28、；W為樣品鮮重（g）；t反應(yīng)時(shí)間（min）。</p><p>　　本次測(cè)定方法參考相關(guān)文獻(xiàn)[11]進(jìn)行操作。酶液提?。喝悠?.5g加入pH7.0的磷酸緩沖溶液少量，研磨成勻漿。將其轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用該緩沖液沖洗研缽，并定容至10mL，于10000r/min下離心15min，上清液即為過氧化氫酶的粗提液，以上操作均在4℃下進(jìn)行。</p><p>　　酶活性測(cè)定：取10mL試管4支，其中1支

29、為對(duì)照管，3支為處理管，按表4順序加入試劑，其中對(duì)照管中加入的粗酶液為煮死后的酶液。</p><p>　　表4 各溶液加入量</p><p>　　25℃預(yù)熱后，逐管加入0.1mol/L H2O2 0.3mL，每加完一管立即記時(shí)，并迅速倒入石英比色皿中，240nm下測(cè)定吸光度，每隔1min讀數(shù)1次，共測(cè)4min，待3支管全部測(cè)定完后，計(jì)算酶活力。將每分鐘OD值減少0.01定義為一個(gè)酶活力單

30、位（以上實(shí)驗(yàn)均做3個(gè)平行）。</p><p>　　2.2.2.4 葉綠素含量</p><p>　　高等植物光合作用過程中利用的光能是通過葉綠體色素（光合色素）吸收的。葉綠體色素由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。葉綠素不溶于水，溶于有機(jī)溶劑，可用多種有機(jī)溶劑，如丙酮、乙醇或二甲基亞砜等研磨提取或浸泡提取。葉綠色素在特定提取溶液中對(duì)特定波長的光有最大吸收峰，用分光光度計(jì)測(cè)定在該波長下

31、葉綠素溶液的吸光度（也稱為光密度），再根據(jù)葉綠素在該波長下的吸收系數(shù)即可計(jì)算葉綠素含量。</p><p>　　將測(cè)定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=12.7A663-2.69A645</p><p>　　Cb=22.9A645-4.68A663</p><p>　　據(jù)此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度（Ca、Cb：mg/L），二者之和為總?cè)~綠素的濃度。最后根據(jù)下式

32、可進(jìn)一步求出植物組織中葉綠素的含量：葉綠素的含量（mg/g）=（葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)）/樣品鮮重（或干重）。</p><p>　　操作步驟按文獻(xiàn)[12]進(jìn)行。葉綠素提取：稱取已經(jīng)過預(yù)處理的樣品0.5g放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及5mL純丙酮，研磨成均漿，再加80%丙酮5mL，將勻漿轉(zhuǎn)入離心管，并用適量80%丙酮洗滌研缽，一并轉(zhuǎn)入離心管，離心后棄沉淀，上清液用80%的丙酮定

33、容至25mL。</p><p>　　測(cè)定光密度：取葉綠體色素提取液1mL，加80%丙酮4mL稀釋后轉(zhuǎn)入比色皿中，以80%丙酮為對(duì)照，分別測(cè)定波長663nm、645nm下測(cè)定吸光度并進(jìn)行計(jì)算。</p><p><b>　　3 結(jié)果與分析</b></p><p>　　3.1 三葉木通不同發(fā)育階段對(duì)超氧化物歧化酶（SOD）活性的影響</p>

34、;<p>　　超氧化物歧化酶（SOD）是活性氧清除系統(tǒng)中最重要的抗氧化酶，在保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷過程中具有十分重要的作用[13]。SOD能催化氧自由基的歧化反應(yīng)，生成H2O2和O2，H2O2在過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶催化下轉(zhuǎn)化為水而得以清除[13-15]。因此，SOD在機(jī)體內(nèi)實(shí)為氧自由基的消除劑，是生物體抗氧化脅迫的關(guān)鍵酶類，其活性決定了O2和H2O2的濃度。</p>&

35、lt;p>　　本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同時(shí)期江北三葉木通的嫩葉、老葉、嫩莖、老莖的超氧化物歧化酶活性變化進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果見圖1。由圖1可見，隨著三葉木通的生長與發(fā)育，嫩葉的SOD活性變化不大；而老葉與嫩莖則持續(xù)增加，其中10月份SOD活性迅速增長，分別比九月份增加了2.1和2.0倍，到11月份活性增長速度減慢。試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，老莖的SOD活性在10月份有所下降，在11月份又迅速增長，這可能與SOD在不同階段的合成與降解特性有關(guān)，有待于進(jìn)一步研究與探

36、討。</p><p>　　圖1 三葉木通不同發(fā)育階段對(duì)超氧化物歧化酶（SOD）活性的影響</p><p>　　注：9-為9月份，10-為10月份，11-為11月份；1為嫩葉，2為老葉，3為嫩莖，4為老莖</p><p>　　3.2 三葉木通不同發(fā)育階段對(duì)多酚氧化酶（PPO）活性的影響</p><p>　　植物組織酶促褐變是由于多酚氧化酶（PP

37、O）與酚類物質(zhì)的區(qū)域化分布被打破，PPO催化酚類物質(zhì)氧化、聚合所引起[16]。PPO分布于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)、質(zhì)體、線粒體等細(xì)胞器中，而酚類物質(zhì)存在于液泡中，在正常條件下，由于PPO和褐變底物（酚類物質(zhì)）在細(xì)胞中區(qū)域化的分布，果實(shí)不會(huì)發(fā)生褐變。逆境或衰老等因素會(huì)刺激活性氧增加，損傷細(xì)胞結(jié)構(gòu)，打破PPO與酚類物質(zhì)的區(qū)室化分布，引起果實(shí)褐變[17]。多酚氧化酶（PPO）是植物體中的保護(hù)酶，它的強(qiáng)弱直接關(guān)系到植株抵御病害的能力，它的活性越大其抗病性

38、越強(qiáng)；反之，活性越小，植株的抗病性越弱[8]。</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同時(shí)期江北三葉木通的嫩葉、老葉、嫩莖、老莖的多酚氧化酶活性變化進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果見圖2。由圖2可見，隨著三葉木通的生長與發(fā)育，嫩葉，老葉，嫩莖在10月份迅速增長，分別比9月增長了0.59，0.58，0.55倍，老莖增長速度相對(duì)緩慢。試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)11月份三葉木通PPO活性整體迅速下降。這種結(jié)果可能是由于，這可能與PPO在不同階段的合成與降解特

39、性有關(guān)，有待于進(jìn)一步研究與探討。</p><p>　　圖2 三葉木通不同發(fā)育階段葉片與莖的多酚氧化酶（PPO）活性的研究</p><p>　　注：9-為9月份，10-為10月份，11-為11月份；1為嫩葉，2為老葉，3為嫩莖，4為老莖</p><p>　　3.3 三葉木通不同發(fā)育階段對(duì)過氧化氫酶（CAT）活性的影響</p><p>　　過氧化

40、氫酶（CAT）是生物體內(nèi)主要的抗氧化酶之一。其功能是催化細(xì)胞內(nèi)過氧化氫的分解，從而使細(xì)胞免于遭受過氧化氫的毒害。幾乎所有的生物體都存在過氧化氫酶，可以反映某一時(shí)期植物體內(nèi)代謝的變化。在植物中過氧化氫酶主要清除光呼吸、線粒體電子傳遞以及脂肪酸β-氧化等過程中產(chǎn)生的H2O2[16]。</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同時(shí)期江北三葉木通的嫩葉、老葉、嫩莖、老莖的過氧化氫酶活性變化進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果見表5。由表5可見，嫩葉，

41、老葉，嫩莖，老莖的CAT活性在10月份迅速增長。試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，嫩葉、老葉、老莖在11月份的CAT活性迅速減少，而嫩莖活性的變化不是很明顯。這可能與不同組織部位CAT的分布與含量有關(guān)，光合作主要在組織葉內(nèi)進(jìn)行，產(chǎn)生H2O2量較多，故不同發(fā)育階段主要影響植物組織葉內(nèi)CAT活性。</p><p>　　表5 三葉木通不同發(fā)育階段葉片與莖的過氧化氫酶（CAT）活性的研究（U*g-1*min-1）</p>&l

42、t;p><b>　　續(xù)表5</b></p><p>　　注：表中數(shù)據(jù)2為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差</p><p>　　3.4 三葉木通不同發(fā)育階段對(duì)綠素含量的影響</p><p>　　葉片葉綠素含量與光合作用密切相關(guān)，是反眏葉片生理狀態(tài)的重要指標(biāo)。在植物光合生理、發(fā)育生理和抗性生理研究中經(jīng)常需要測(cè)定葉綠素含量。葉綠素含量也是指導(dǎo)作物栽培生

43、產(chǎn)和選育作物品種的重要指標(biāo)。</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同時(shí)期江北三葉木通的嫩葉、老葉、嫩莖、老莖的葉綠素變化進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果見圖3。由圖3可見，隨著三葉木通的生長與發(fā)育，嫩葉的葉綠素含量變化不大；而老葉則持續(xù)增加，其中10月份SOD活性迅速增長，比9月份增長了2.5倍，11月份比10月份增長了0.57倍。試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，隨著三葉木通的生長與發(fā)育，嫩莖、老莖的葉綠素含量持續(xù)降低。</p><p

44、>　　圖3 三葉木通不同發(fā)育階段葉片與莖葉綠素含量的研究</p><p>　　注：9-為9月份，10-為10月份，11-為11月份；1為嫩葉，2為老葉，3為嫩莖，4為老莖</p><p><b>　　4 結(jié)論</b></p><p>　　超氧化物歧化酶（SOD）與過氧化氫酶（CAT）在生物體內(nèi)都具有非常重要的生理功能。它們都是是活性氧清除

45、系統(tǒng)中最重要的抗氧化酶，在保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷過程中具有十分重要的作用[13]。SOD與CAT等一起構(gòu)成了生物體內(nèi)重要的酶促反應(yīng)防御體系，從而維護(hù)生物體內(nèi)細(xì)胞正常的生理代謝和生化反應(yīng)。多酚氧化酶（PPO）是植物體中的保護(hù)酶，它的強(qiáng)弱直接關(guān)系到植株抵御病害的能力，它的活性越大其抗病性越強(qiáng)；反之，活性越小，植株的抗病性越弱[16]。在植物生長發(fā)育過程中，這種酶的活性不斷發(fā)生變化。PPO是含銅的酶，在正常的情況下，PPO和底物在細(xì)胞質(zhì)中是分開

46、的。當(dāng)細(xì)胞受輕微破壞組織衰老時(shí)，有些細(xì)胞結(jié)構(gòu)解體時(shí)，多酚氧化酶（PPO）和底物接觸，發(fā)生反應(yīng)，將酚氧化為棕褐色的醌。醌對(duì)微生物有毒，可防止植物感染。葉綠素是反映葉片生理狀態(tài)的重要指標(biāo)，其含量也是指導(dǎo)作物栽培生產(chǎn)和選育作物品種的重要指標(biāo)。</p><p>　　試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PPO和CAT的活性在10月份最大，主要體現(xiàn)于植株的葉部分。葉部位中SOD的活性和葉綠素的含量隨著時(shí)間是遞增的，莖部位的葉綠素含量隨著時(shí)間是遞減

47、的。這種結(jié)果可能是同一植株中不同組織部位酶分布不同。隨著三葉木通的生長與發(fā)育，嫩葉、老葉、嫩莖、老莖的SOD活性在11月份達(dá)到最大，分別為15.323U、48.627U、46.216U、19.762U；PPO活性在10月份達(dá)到最大，分別為52.321U、53.201U、37.207U、25.712U；CAT活性10月份最大；嫩葉、老葉的葉綠素含量持續(xù)增長，在11月份達(dá)到最大，分別為19.315mg/g、53.709mg/g；嫩莖、老莖持

48、續(xù)降低，11月份的含量分別為11.305mg/g、8.756mg/g。由此表明，不同發(fā)育階段三葉木通葉片抗氧化酶活性與葉綠素含量變化較大。從整體上看，10-11月份的酶活性較大，植株的抗氧化、抗病蟲、抗逆境等能力更強(qiáng)。因此，本試驗(yàn)可以為以后生產(chǎn)上市江北三葉木通選擇適宜的種植時(shí)期提供一定的理論依據(jù)，具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><

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56、謝</b></p><p>　　本研究是在王老師的精心指導(dǎo)和大力支持下完成的。王老師以其嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的治學(xué)態(tài)度和高度的敬業(yè)精神對(duì)我產(chǎn)生了重要影響。從論文的選題到最后的答辯，每一個(gè)環(huán)節(jié)，無不得到他的悉心指導(dǎo)和幫助。謹(jǐn)此之際，對(duì)王老師諄諄教誨和精心培養(yǎng)表示衷心的感謝。另外，我要特別感謝一起做畢業(yè)設(shè)計(jì)的同學(xué)們的幫忙，使我得以順利完成論文。在此我也衷心的感謝他們。最后，再次對(duì)關(guān)心、幫助我的老師和同學(xué)表示衷心地感謝