雙須骨舌魚雌雄鑒別與性腺發(fā)育研究.pdf

1、雙須骨舌魚(Osteoglossum bicirrhosum),俗稱銀龍魚(silver arowana),隸屬于骨舌魚科(Osteoglossidae),骨舌魚屬(Osteoglossum),是現(xiàn)存的7種骨舌魚科魚類之一,素有“活化石”之稱。雙須骨舌魚原產(chǎn)于南美洲的圭亞那和亞馬遜河,在當(dāng)?shù)厥且环N重要的食用魚類,但在亞洲則是一種著名的觀賞性魚類,深受人們的喜愛(ài),具有較高的價(jià)值。但是,到目前為止,對(duì)該種魚繁殖相關(guān)生物學(xué)的研究相對(duì)較匱乏,國(guó)

2、內(nèi)繁殖技術(shù)還沒(méi)有完全成功。雙須骨舌魚雌雄魚在外部形態(tài)上難以區(qū)分,即使是在生殖季節(jié),雌雄性別特征也不明顯,另外對(duì)其性腺發(fā)育的研究也未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)手段以及組織切片的方法對(duì)雙須骨舌魚的雌雄和性腺發(fā)育等進(jìn)行了研究。以期為突破雙須骨舌魚繁殖技術(shù)提供理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.雙須骨舌魚形態(tài)特征與核型分析
　　通過(guò)對(duì)試驗(yàn)魚的觀察、測(cè)量、解剖和拍照,描述了雙須骨舌魚(Osteoglossum bicirr

3、hosum)的外部形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu),并對(duì)其核型進(jìn)行了分析:雙須骨舌魚體側(cè)扁;口上位,口裂大;側(cè)線發(fā)達(dá),側(cè)線鱗數(shù)35-36;鰭式分別為D43-46;PⅠ-6;VⅠ-5;A50-54,C12;體長(zhǎng)/體高5.34、體長(zhǎng)/頭長(zhǎng)5.23、體長(zhǎng)/尾柄長(zhǎng)97.62、體長(zhǎng)/尾部長(zhǎng)1.82;頭長(zhǎng)/吻長(zhǎng)3.95、頭長(zhǎng)/眼徑6.04和頭長(zhǎng)/眼間距2.96;體高/體寬2.05;無(wú)雌雄異型現(xiàn)象。胃發(fā)達(dá)呈U型,幽門盲囊短且粗;鰾1室,與體腔等長(zhǎng)且位于體腔上部緊貼脊椎

4、骨。
　　以腎臟為材料,用空氣干燥法制備染色體標(biāo)本,雙須骨舌魚的染色體數(shù)目為2n=56,核型公式為2sm+26st+28t,NF=58,但未見(jiàn)異型性染色體。
　　2.利用RSAP和SSR技術(shù)進(jìn)行雙須骨舌魚的雌雄鑒定
　　采用RSAP(Restriction site amplified polymorphism)和SSR(Simple Sequence Repeats)分子標(biāo)記技術(shù),對(duì)雙須骨舌魚進(jìn)行雌雄鑒定。RSAP的

5、45對(duì)引物除R1R8和R2R5不能擴(kuò)增出條帶外,其余43對(duì)引物(95.6％)均能擴(kuò)增出清晰的條帶,在這44對(duì)引物中R1R9、R1R10、R2R3、R2R4、R2R7、R2R8、R2R10、R3R6、R3R10、R4R9、R4R10、R6R8、R8R9等13對(duì)引物(29%)具有較好的多態(tài)性。SSR的55對(duì)引物除在調(diào)整退火溫度后都能擴(kuò)增出條帶。但是,無(wú)論是RSAP還是SSR均未找到雌雄特異性片段,但我們檢驗(yàn)了SSR引物的適用性并首次將RSA

6、P技術(shù)運(yùn)用到了脊椎動(dòng)物雙須骨舌魚中,證明了其適用性。這對(duì)RSAP技術(shù)在脊椎動(dòng)物中的推廣以及利用該技術(shù)研究雙須骨舌魚的遺傳多樣性、連鎖圖譜構(gòu)建和基因定位等有積極意義。
　　3.雙須骨舌魚性腺發(fā)育研究
　　在繁殖季節(jié)選取了各年齡段的雙須骨舌魚,通過(guò)對(duì)樣本的生物學(xué)數(shù)據(jù)測(cè)量,解剖性腺外部形態(tài)特征觀察,以及Bouin’s液固定后的性腺組織切片觀察等方法,對(duì)雙須骨舌魚性腺的外部形態(tài)和生殖細(xì)胞的形態(tài)以及變化情況進(jìn)行了詳細(xì)的描述。通過(guò)對(duì)雌魚

7、的觀察發(fā)現(xiàn):4月齡雙須骨舌魚處于卵巢發(fā)育的Ⅱ期,所含卵母細(xì)胞絕大部分為Ⅱ時(shí)相卵母細(xì)胞,細(xì)胞核所占比例較大,約為細(xì)胞體積的一半,同時(shí)還含有少量Ⅰ時(shí)相的卵母細(xì)胞,細(xì)胞界限不明顯;8月齡至2齡雙須骨舌魚的卵巢為Ⅲ期,所含卵母細(xì)胞主要為Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞,出現(xiàn)卵黃斑和卵黃顆粒;2-3齡雙須骨舌魚卵巢為第Ⅳ期卵巢,所含卵母細(xì)胞主要為第Ⅳ時(shí)相的卵母細(xì)胞,卵母細(xì)胞的最大特點(diǎn)是卵膜出現(xiàn)褶皺以及卵黃迅速積累;3齡以上雙須骨舌魚卵巢為第Ⅴ期卵巢,所含卵母細(xì)胞大

8、多為第Ⅴ時(shí)相卵母細(xì)胞,細(xì)胞膜表面的褶皺消失。通過(guò)對(duì)雄魚的觀察發(fā)現(xiàn):4月齡雙須骨舌魚處于精巢發(fā)育的Ⅱ期,只含有初級(jí)精母細(xì)胞,精小管結(jié)構(gòu)未形成;8月齡至2齡雙須骨舌魚的精巢為Ⅲ期,所含精母細(xì)胞主要為初級(jí)精母細(xì)胞和次級(jí)精母細(xì)胞,精小管形成且小管中充滿精細(xì)胞;2-3齡雙須骨舌魚精巢為第Ⅳ期精巢,所含精母細(xì)胞主要為初級(jí)精母細(xì)胞和次級(jí)精母細(xì)胞以及精原細(xì)胞,精小管中出現(xiàn)空腔;3齡以上雙須骨舌魚精巢為第Ⅴ期精巢,所含精母細(xì)胞為次級(jí)精母細(xì)胞、精原細(xì)胞和精