家蠶Bme細胞自噬與凋亡關系初步研究.pdf

1、近年，細胞自噬與細胞凋亡關系的研究進展備受關注，因為它涉及到生物的發(fā)育，聯(lián)系著一些疾病的發(fā)生，演繹著生命的維系與延續(xù)等。有關哺乳動物細胞，特別是癌細胞自噬與凋亡相互關系的研究已經取得了許多重要的進展，二者的關系比較復雜，因細胞類型、誘導因子或細胞的狀態(tài)等因素不同，或相互促進、相互拮抗，相互獨立。目前有關昆蟲細胞自噬與細胞凋亡關系的報道尚少，需要深入開展此方面的研究。
　　 本文以離體培養(yǎng)的家蠶細胞Bme為材料，采用多種不同的方法

2、進行誘導，提高家蠶細胞Bme的自噬水平，通過熒光定性定量分析，電子顯微鏡技術，流式細胞術，酶學分析和瓊脂糖凝膠電泳等技術，研究了離體培養(yǎng)的家蠶細胞高水平自噬作用對細胞凋亡的影響。
　　 結果表明：雷帕霉素處理和氨基酸饑餓都能誘導家蠶細胞Bme內MDC染色陽性小泡(自噬泡和自噬溶酶體)數(shù)量增多和體積增大；電鏡觀察表明雷帕霉素處理4h后，細胞內的線粒體數(shù)量減少，體積膨大，自噬泡數(shù)量增多。初步的定量分析表明經饑餓后，4h時發(fā)生高水平自

3、噬作用的細胞從對照組6.1％上升至了15.9％，8h時發(fā)生高水平自噬作用的細胞下降至12.4％。誘導早期細胞內caspase-3的活性較低，但是后期細胞內caspase-3的活性顯著升高，在12h時caspase-3的活性是對照組細胞的近10倍。同時，兩種自噬誘導方法處理的細胞經AnnexinV-FITC/PI雙染流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn)細胞膜磷脂酰絲氨酸外翻，細胞的凋亡率顯著增加。雷帕霉素處理12h的早期凋亡細胞率從5％提高到24％，氨基酸

4、饑餓處理12h的早期細胞凋亡率從5％提高到16％。光學顯微鏡下可明顯看到形成的凋亡小體，經DAPI染色可以看到染色質凝集和碎裂。瓊脂糖凝膠電泳檢測發(fā)現(xiàn)DNA片段化，出現(xiàn)梯形條帶。采用3甲基腺嘌呤抑制細胞自噬可以顯著降低饑餓細胞的凋亡率，但細胞壞死的比例卻有所增加。同時還表明，抑制家蠶細胞Bme基礎水平的自噬作用，也不利于細胞生存。
　　 以上結果表明，在一定條件下家蠶細胞的誘導性高水平自噬作用先于細胞凋亡或至少同時發(fā)生，并且高水