玉米抗蚜蟲(chóng)基因轉(zhuǎn)化體系的研究.pdf

1、玉米是世界上分布最廣泛的糧食作物之一，長(zhǎng)期以來(lái)，種植面積僅次于小麥和水稻而居世界第三位。玉米在我國(guó)的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和國(guó)民經(jīng)濟(jì)中一直都占有著十分重要的地位。但近些年來(lái)，隨著我國(guó)玉米種植面積的逐年擴(kuò)大，玉米蚜蟲(chóng)等各種病蟲(chóng)害普遍發(fā)生，嚴(yán)重影響了我國(guó)玉米的產(chǎn)量和品質(zhì)。
　　 針對(duì)這-現(xiàn)狀，本試驗(yàn)以玉米幼胚培養(yǎng)再生體系為基礎(chǔ)，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行抗蚜蟲(chóng)基因的遺傳轉(zhuǎn)化研究，旨在通過(guò)轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化將從薄荷中提取的抗蚜蟲(chóng)基因EBF轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞并再生植

2、株，創(chuàng)造抗蚜蟲(chóng)玉米新種質(zhì)，為抗蚜蟲(chóng)玉米品種的選育奠定基礎(chǔ)。
　　 本試驗(yàn)從玉米受體材料培養(yǎng)體系優(yōu)化、表達(dá)載體的優(yōu)化、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化和抗生素篩選體系的優(yōu)化幾方面探討了一套適合玉米轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)化體系。
　　 在玉米受體材料體系中，從愈傷組織的出愈率、表型和繁殖能力三方面的差異，認(rèn)為昌7-2×HiⅡ A為較好的愈傷組織培養(yǎng)材料。因此，本試驗(yàn)將以昌7-2×HiⅡA的愈傷組織為轉(zhuǎn)化受體進(jìn)行轉(zhuǎn)化效率的研究。
　　 在表達(dá)

3、載體體系優(yōu)化中，比較了以pNCX為載體和以pBJ40為載體的兩種表達(dá)載體的轉(zhuǎn)化差異，無(wú)論是從篩選中愈傷組織的狀態(tài)、篩選后所得抗性愈傷的塊數(shù)，還是最終的再生苗數(shù)都說(shuō)明以pNCX為載體比以pBJ40為載體轉(zhuǎn)化效果好。
　　 在農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化中，從農(nóng)桿菌侵染時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響判斷出，對(duì)于玉米材料鄭22×87-1和昌7-2×HiⅡA的愈傷組織浸染時(shí)間不能超過(guò)15min，以10min較為合適，不同材料的愈傷組織會(huì)因其狀態(tài)的不同而有

4、差別。
　　 在抗生素篩選體系的優(yōu)化中，比較了抗生素G418和Kan對(duì)愈傷組織的篩選差異。結(jié)果顯示，濃度為15 mg·L-1的G418篩選一次就能有效抑制玉米愈傷組織的生長(zhǎng)，而用Kan濃度20 mg·L-1篩選兩次后仍不見(jiàn)有愈傷組織的褐化死亡現(xiàn)象，說(shuō)明玉米愈傷組織對(duì)抗生素G418敏感而對(duì)Kan不夠敏感，用Kan篩選容易產(chǎn)生假陽(yáng)性植株。
　　 試驗(yàn)在優(yōu)化體系的同時(shí)還比較完整地進(jìn)行了用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將抗蚜蟲(chóng)基因EpF轉(zhuǎn)入玉米愈