抗鹽堿BADH基因轉(zhuǎn)化玉米的研究.pdf

1、土壤的鹽堿脅迫是降低農(nóng)作物產(chǎn)量的主要環(huán)境因素之一。因此,研究和培育耐鹽堿植物,對(duì)綜合開(kāi)發(fā)利用鹽漬土壤、提高農(nóng)作物產(chǎn)量意義重大。玉米產(chǎn)業(yè)在國(guó)民經(jīng)濟(jì)中占有非常重要的地位,但玉米是對(duì)鹽分中度敏感的作物,耐鹽性差。因此,培育耐鹽玉米品種具有重要的意義。B73玉米自交系是一種廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因研究的受體品種,通過(guò)基因工程手段將耐鹽堿基因BADH(Betaine aldehydedehydrogenase,甜菜堿醛脫氫酶)導(dǎo)入B73玉米自交系,培育出

2、耐鹽堿的B73玉米自交系,進(jìn)而以期與高產(chǎn)玉米品種雜交,從而獲得既耐鹽堿又高產(chǎn)的玉米品種。
　　 本研究利用基因槍轟擊法將克隆自新疆鹽堿灘上生長(zhǎng)的異苞濱藜植物的耐鹽堿BADH基因用基轉(zhuǎn)入B73玉米胚性愈傷組織,以bar基因作為篩選標(biāo)記,利用加入雙丙胺膦的選擇性培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)化愈傷,對(duì)T0代、T1代植株進(jìn)行分子檢測(cè)和抗性檢測(cè),獲得了具有耐鹽堿特性的轉(zhuǎn)化植株,并得到轉(zhuǎn)BADH基因種子。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、構(gòu)建了含有ub

3、i啟動(dòng)子的p3300-ubi-BADH植物表達(dá)載體；
　　 2、確定了B73玉米胚性愈傷組織的雙丙氨磷篩選壓為2mg／L；
　　 3、用基因槍轟擊法對(duì)B73玉米胚性愈傷組織進(jìn)行轉(zhuǎn)化,得到了196塊抗性愈傷,58株再生植株,最終成活19株,有16株為PCR陽(yáng)性植株,結(jié)實(shí)3株；
　　 4、通過(guò)對(duì)T0代轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行PCR檢測(cè)和Southern Blot分析,初步證實(shí)了抗鹽堿BADH基因已整合到玉米基因組中；