仿刺參中抗菌肽的分離純化及抗菌和骯腫瘤活性研究.pdf

1、仿刺參(Apostichopus Japonicus)是一種重要的海洋物種，主要分布在太平洋的東西兩岸及印度洋中。海參商業(yè)品種的育苗工作開始于20世紀80年代，日本、中國、印度等國家先后取得成功。由于其含有豐富的黏多糖和蛋白質(zhì)等，且具有營養(yǎng)價值和藥用價值高等特點，因此在山東和遼寧等地很快成為一種重要的養(yǎng)殖品種。
　　 本研究采用甲醇浸提和凝膠過濾層析的方法，以仿刺參腸道為材料米提取抗菌肽，并采用濾紙片擴散法和MTT法測定其體外抗

2、菌活性及體外抗腫瘤活性。其中，抗菌活性實驗對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、哈維氏弧菌、副溶血弧菌、枯草桿菌、溶壁微球菌、遲鈍愛德華菌、鰻弧菌8種常見菌的最小抑菌濃度(Minimal inhibitory concentration，MIC)進行了測試。另外，通過SDS-PAGE和高效液相色譜(HPLC)的方法對仿刺參抗菌肽的組成進行了進一步的分析。
　　 對仿刺參抗菌肽粗提物進行凝膠過濾層析分離后，得到了3個不同的組分，分別命名為A

3、1、A2、A3，活性實驗發(fā)現(xiàn)仿刺參抗菌肽A3具有顯著地抑菌活性和抑腫瘤活性。MIC結(jié)果顯示，仿刺參抗菌肽A3對溶壁微球菌、副溶血弧菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、哈維氏弧菌、遲鈍愛德華菌、鰻弧菌、枯草桿菌的最小抑菌濃度分別為0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.0mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml、2.0mg/ml、2.0mg/ml、4.0mg/ml。同時發(fā)現(xiàn)仿刺參抗菌肽A3對肺癌A549細胞的增殖具有一定的抑制效果。SDS

4、-PAGE電泳顯示仿刺參抗菌肽A3的分子量為6.5kD左右，HPLC結(jié)果可以看出仿刺參抗菌肽A3有四個不同的組分構(gòu)成。
　　 本實驗對仿刺參抗菌肽的功能進行了研究，發(fā)現(xiàn)了仿刺參抗菌肽A3對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌具有明顯的抗菌活性，對肺癌A549細胞增殖的抑制作用呈明顯的劑量依賴關(guān)系。這一研究可能對抗菌及抗腫瘤新藥的研發(fā)具有一定的意義，近年來，抗生素被人們大量使用，由此帶來了細菌耐藥性問題，為了解決這一問題，我們可以考慮使用仿