農(nóng)桿菌介導(dǎo)單、雙價(jià)抗蟲基因Bt、Bt-pinⅡ基因?qū)τ^賞羽衣甘藍(lán)的遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、觀賞羽衣甘藍(lán)(Brassicaoleracea var．a(chǎn)cephala)，屬十字花科蕓薹屬甘藍(lán)種的園藝變種，是一種賞食兼用的耐凍優(yōu)良景觀植物。羽衣甘藍(lán)的在生長期易發(fā)生蟲害，影響其生產(chǎn)及觀賞價(jià)值。而目前的育種資源中，尚無相應(yīng)的種質(zhì)。要解決這兩個(gè)問題，有希望的途徑就是通過現(xiàn)代基因工程技術(shù)，引入外源抗性基因，創(chuàng)制新的抗性種質(zhì)。但其育種研究尚處于起步階段，國際上鮮有研究報(bào)道，缺乏針對育種目的、育種材料的詳細(xì)研究資料。國內(nèi)利用基因工程手段改良其

2、性狀還是一個(gè)空白。 本研究通過基因工程為技術(shù)手段，將所克隆的抗蟲基因?qū)胗^賞羽衣甘藍(lán)，賦予其新的性狀，以期獲得優(yōu)良的抗蟲種質(zhì)資源。主要結(jié)論如下： 1．以8份不同類型羽衣甘藍(lán)的優(yōu)良育種品系為試材，建立高頻再生體系，篩選出兩份材料，其帶柄子葉分別在L6(MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L)及L3(MS+6-BA1.5mg/L)培養(yǎng)基中不定芽誘導(dǎo)率為100％，每外植體上的不定芽數(shù)高達(dá)25個(gè)。下胚軸誘導(dǎo)率最高也能

3、達(dá)88.33％： 2．根據(jù)感染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間、外植體的脫菌和Basta選擇壓的確定等因素與轉(zhuǎn)化頻率的相關(guān)性研究，建立了適合于觀賞羽衣甘藍(lán)皺白1的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化體系即：侵染時(shí)間3-5min；黑暗共培養(yǎng)2天；Basta篩選壓為5mg/L：菌液OD值為0.3-0.5； 3．克隆了Bt基因和Bt-PinⅡ融合基因，構(gòu)建了pBAC171、pBAC172和pBAC173三個(gè)植物表達(dá)載體。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將基因分別導(dǎo)入羽衣甘藍(lán)