傳染性法氏囊病病毒滄州株的分離鑒定與VP2基因的克隆及序列分析.pdf

1、傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的雞和火雞的一種高度接觸性傳染病對世界養(yǎng)禽業(yè)危害極大,本病以損傷雞的中樞免疫器官法氏囊中的淋巴細胞為特征,主要侵害對象為3-6周齡雛雞和青年雞,臨診表現(xiàn)主要為精神不振、厭食、間歇性腹瀉、震顫以及高度虛弱;病理剖檢主要以脫水,骨骼肌出血,腎小管尿酸鹽沉積、法氏囊腫

2、大、出血、呈紫葡萄狀為特征。接種疫苗是預防該病最有效的途徑。
　　 本研究通過對河北省滄州地區(qū)幾個肉雞養(yǎng)殖場送檢的疑似雞傳染性法氏囊病病料進行檢測,并結合瓊脂擴散實驗,免疫膠體金試紙檢測和實驗室分子生物學試驗,獲得了3株雞傳染性法氏囊病病毒,分別暫時命名為CZ-1,CZ-2和CZ-3。通過對3株地方流行株的致病性測定、動物回歸實驗以及免疫指數(shù)的測定,表明CZ-1毒株的毒力較強于其他2個分離株。
　　 VP2蛋白是IBDV

3、的主要結構蛋白,同時也是病毒的重要的毒力蛋白和主要宿主保護性抗原。IBDV毒力的變異主要集中在VP2的高變區(qū),它是病毒的主要變異區(qū)。VP2蛋白是主要的宿主保護性抗原,是IBDV毒力變異的關鍵。本實驗通過VP2高變區(qū)的引物設計方案設計引物,用RT-PCR方法,從樣品中成功擴增出雞傳染性法氏囊病毒(CZ-1株)基因的VP2高變異區(qū),將其回收并克隆到PMD-19-T載體上,通過酶切進行驗證,將陽性的質粒送到上海生工生物技術有限公司進行序列測定

4、,將測定結果在Genbank中進行比較,確定所得到的序列即為雞傳染性法氏囊病毒VP2高變異區(qū)基因,利用DNAstar,Clustal和Megaline等相關基因分析軟件,對所得到的基因序列進行同源性及序列分析,并通過進化樹的繪制和蛋白氨基酸的同源性比較,來了解地方流行毒株的變異情況。
　　 將VP2基因序列分析表明,所得到的流行毒株與其他近期所報道的我國流行強毒株的同源性均在90％以上。發(fā)現(xiàn)滄州地區(qū)近期流行雞傳染性法氏囊病毒VP