副豬嗜血桿菌保護(hù)性抗原的篩選與鑒定.pdf

1、副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,HPS)是豬的一種呼吸道共棲菌,在特定條件下可侵入機(jī)體而引起嚴(yán)重的全身性疾病,該病被稱為副豬嗜血桿菌病或革拉澤氏病(Gl(a)sser's disease)。以多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎和肺炎為主要特征,是目前危害全球養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的細(xì)菌性傳染病之一。
　　 HPS至少有15種血清型,不同地區(qū)和豬場(chǎng)流行的優(yōu)勢(shì)血清型不盡相同,血清型間的毒力和抗原性差異較大,缺乏有效的交叉免疫

2、保護(hù)力。因此,研制特異、敏感和快速的分型與診斷方法,鑒定有效的交叉保護(hù)性抗原對(duì)副豬嗜血桿菌病的有效防控具有重要意義。本研究運(yùn)用動(dòng)物試驗(yàn),從本實(shí)驗(yàn)室鑒定出的HPS體內(nèi)誘導(dǎo)基因和應(yīng)激響應(yīng)基因中篩選保護(hù)性抗原,為診斷試劑和基因工程疫苗的研制奠定基礎(chǔ)。
　　 對(duì)本實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用轉(zhuǎn)錄序列選擇性捕獲(SCOTS)技術(shù)篩選到的38個(gè)HPS體內(nèi)誘導(dǎo)表達(dá)基因、39個(gè)熱應(yīng)激基因和36個(gè)貧鐵應(yīng)激基因,進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,根據(jù)其細(xì)胞定位、疏水性、抗原性預(yù)

3、測(cè)結(jié)果,篩選和克隆了其中33個(gè)基因,在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá),純化了其中24種重組蛋白。用重組蛋白免疫小鼠制備了DnaK、GidA、GmhA、ComJ、RffA、SiaB、AlaS和Mivm八種多克隆抗體。用免疫熒光染色和流式細(xì)胞術(shù)研究了這8種蛋白在HPS中的細(xì)胞定位及與豬肺上皮細(xì)胞(St.Judeporcine lung cell,SJPLC)的相互作用,結(jié)果表明,DnaK、PilA、RffA和SiaB為HPS的表面蛋白,GidA、Pil

4、A、RffA和SiaB能夠與SJPLC細(xì)胞結(jié)合。
　　 將重組蛋白DnaK、GidA、PilA、RffA和SiaB分別與氫氧化鋁佐劑混合制備成亞單位疫苗,與佐劑對(duì)照和HPS滅活疫苗對(duì)照分別免疫30日齡仔豬各3頭,間隔2周加強(qiáng)免疫2次,二周后用2×1010 CFU的HPS血清5型0165強(qiáng)毒株攻擊。根據(jù)仔豬存活率、抗體水平、臨床癥狀和病理剖檢情況進(jìn)行綜合評(píng)價(jià),結(jié)果顯示:Ⅳ型菌毛蛋白PilA具有較好的免疫保護(hù)力。由于該抗原基因在HP