大豆異黃酮開環(huán)菌株及其代謝產(chǎn)物的分離鑒定與活性研究.pdf

1、大豆異黃酮是大豆在其生長過程中形成的次生代謝產(chǎn)物，主要包括：黃豆苷原(daidzein)和染料木素(genistein)。攝入動物體內(nèi)的大豆異黃酮，在胃腸道微生物作用下被代謝為不同代謝產(chǎn)物，其中黃豆苷原最終被降解為雌馬酚(equol)和去氧甲基安哥拉紫檀素(O-desmethylangolensin，簡稱O-Dma)。人群中大約80％～90％的個體，其腸道微生物能將攝入體內(nèi)的黃豆苷原轉(zhuǎn)化為O-Dma。以前大多數(shù)人認為O-Dma的活性很低

2、，但最近有報道稱O-Dma 不僅與人體雌激素受體Erα和Erβ的親和力高于其前體黃豆苷原，而且與Erβ結(jié)合后，在誘導基因轉(zhuǎn)錄上O-Dma 也強于黃豆苷原。此外，當濃度高于10μmol/L，O-Dma能夠明顯抑制人乳腺癌細胞MCF-7的生長。
　　 AUH-HM195(EU919863)菌株是國內(nèi)外首次從褐馬雞糞樣中分離的一株對大豆異黃酮黃豆苷原具有開環(huán)轉(zhuǎn)化作用的兼性細菌菌株。該菌株菌落為圓形，光學顯微鏡下該菌體呈球形或橢球形，根

3、據(jù)菌落及菌體形態(tài)特征以及糖發(fā)酵、觸酶、吲哚試驗等常規(guī)生理生化測定結(jié)果，初步確定該菌株為腸球菌屬。通過BLAST 比對，菌株AUH-HM195的16S rDNA 與海氏腸球菌Enterococcus hirae(DSM20160)的序列相似性達到100％。因此，褐馬雞腸道分離菌株AUH-HM195 鑒定為海氏腸球菌Enterococcus hirae AUH-HM195。
　　 以大豆異黃酮黃豆苷原為底物，以菌株Enterococ

4、cus hirae AUH-HM195 為生物酶源，采用高效液相方法對底物黃豆苷原代謝產(chǎn)物進行檢測。出現(xiàn)兩個物質(zhì)峰，其中一個隨著底物的減少逐漸增加，確定為底物的代謝峰。另外一個峰的增加與底物的減少不同步進行，將該峰定為未知峰。根據(jù)高效液相色譜保留時間、紫外吸收光譜，以及核磁共振氫譜(1H)和碳譜(13C)等手段將代謝產(chǎn)物最后確定為去氧甲基安哥拉紫檀素(O-Dma)。
　　 對O-Dma 進行初步抗氧化活性研究，結(jié)果表明它具有一定