兩個棉纖維發(fā)育相關(guān)基因的功能初步分析.pdf

1、棉花是一種優(yōu)良的天然纖維，為重要的紡織工業(yè)原料。棉纖維是由單個表皮細胞分化而來的，在棉纖維發(fā)育過程中合成的纖維素、非纖維素與多糖共同參與著纖維形態(tài)的建成。因此明確棉花纖維發(fā)育相關(guān)基因功能不僅具有生產(chǎn)意義，而且有助于闡明單細胞發(fā)育以及纖維素合成分子機理。本文對本研究室前期克隆的2個棉纖維發(fā)育相關(guān)基因構(gòu)建了植物表達的RNAi干擾載體和過量表達載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進行轉(zhuǎn)基因棉花研究，以闡明相關(guān)基因功能。
　　 首先利用已克隆的一個與

2、擬南芥KORRIGAN基因（編碼跨膜內(nèi)切-1，4-β-葡聚糖酶）高度同源的棉花基因GhCEL，構(gòu)建了該基因的RNAi干擾載體和過量表達載體，在前人研究獲得部分轉(zhuǎn)基因T0代植株的基礎(chǔ)上，進一步進行不同轉(zhuǎn)基因克隆系的創(chuàng)建和鑒定工作。經(jīng)過PCR、潮霉素抗性檢測，共獲得轉(zhuǎn)RNAi載體9個克隆的15個陽性T0代單株的種子，目前有3個克隆已經(jīng)純合。獲得轉(zhuǎn)正義表達載體5個克隆系的7個陽性單株T0代種子。Southern雜交表明，轉(zhuǎn)RNAi載體的外源標

3、記基因HPT已經(jīng)整合進棉花基因組中，其中3個純系都以單拷貝形式插入。纖維素含量的測定表明，轉(zhuǎn)RNAi載體的3個純合株系其成熟纖維的纖維素含量有了顯著的提高，其原因是否因為GhCEL基因受到干擾還需進一步驗證。棉纖維品質(zhì)檢測結(jié)果表明，與對照相比，轉(zhuǎn)RNAi載體純合株系060427-6-3的棉花纖維長度顯著變長、比強度顯著增強、馬克隆值顯著減小、伸長率顯著減少。而其它純系纖維長度卻顯著變短，其它指標沒有發(fā)生變化，其原因需要進一步探討。同時建

4、立了一種簡便、快速選擇抗潮霉素轉(zhuǎn)基因純系后代的方法，Hyg濃度為20ppm可以很容易區(qū)別轉(zhuǎn)基因陽性和非轉(zhuǎn)基因后代。
　　 利用我實驗室前期克隆的棉纖維優(yōu)勢表達基因棉花2，5-二羥基苯乙酸1，2-加雙氧酶基因（GhHGD）構(gòu)建了由纖維特異啟動子E6驅(qū)動的RNAi表達載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將該表達載體轉(zhuǎn)入高頻再生品系WC中，對再生植株小苗進行標記基因nptⅡ的PCR檢測，在檢測的89株轉(zhuǎn)基因小苗中，nptⅡ陽性植株共有81株，陽性率