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1、本研究從關(guān)中奶山羊中克隆得到催乳素基因,并以已有的人t-PA乳腺特異性表達(dá)載體pEBT為基礎(chǔ),成功的構(gòu)建了催乳素和t-PA基因乳腺共表達(dá)載體pPT。轉(zhuǎn)染鼠乳腺癌細(xì)胞EMT6,篩選獲得陽(yáng)性表達(dá)株。本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了催乳素對(duì)提高外源蛋白的表達(dá)有促進(jìn)作用并為利用體細(xì)胞核移植技術(shù)生產(chǎn)牛乳腺生物反應(yīng)器,提供了高效的乳腺表達(dá)載體,對(duì)于提高乳腺生物反應(yīng)器中外源蛋白表達(dá)量的研究進(jìn)行了新的探索。相關(guān)研究結(jié)果如下: 1.通過(guò)RT-PCR技術(shù)成功的從關(guān)中奶
2、山羊中克隆得到長(zhǎng)度為760bp催乳素cDNA基因,其中包含完整的編碼序列。序列分析表明,片段與GenBank中登錄的羊PRLcDNA序列的同源性為99%,且突變不影響蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。 2.利用定向克隆的方法將PRLcDNA基因克隆至已有的人t-PA乳腺特異性表達(dá)載體pEBT,構(gòu)建成催乳素和t-PA基因乳腺共表達(dá)載體pPT。載體含有抗性基因和綠色熒光蛋白(EGFP)報(bào)告基因,并報(bào)告基因和目的基因表達(dá)為融合型表達(dá)。 3.通
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