ISSR分子標(biāo)記對(duì)芒果實(shí)生苗親本鑒別和不同顏色類(lèi)群遺傳多樣性分析的研究.pdf

1、芒果享有“熱帶水果之王”的美譽(yù)，與葡萄、柑橘、香蕉、蘋(píng)果并稱(chēng)“世界五大水果”。商品化、規(guī)模化是我國(guó)南方地區(qū)芒果生產(chǎn)現(xiàn)如今的發(fā)展方向，但芒果的鑒定品種、選種育種及其遺傳規(guī)律相關(guān)的基礎(chǔ)研究絕大多數(shù)還是采用形態(tài)學(xué)標(biāo)記方法。該方法雖然直觀地反映了植物的親緣遠(yuǎn)近及演化關(guān)系，但未能反映植物內(nèi)部的遺傳相關(guān)規(guī)律。采用此法進(jìn)行品種鑒定、雜交育種及其相關(guān)研究存在準(zhǔn)確性低等問(wèn)題。隨著分子生物學(xué)及生物技術(shù)的發(fā)展，特別是分子標(biāo)記在輔助育種、品種鑒定等各個(gè)方面的應(yīng)

2、用，克服了傳統(tǒng)植物學(xué)性狀研究方法的缺陷，促進(jìn)了芒果育種、鑒定品種和遺傳多樣性研究的發(fā)展。本試驗(yàn)研究采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)芒果實(shí)生苗親本鑒定、不同顏色類(lèi)群芒果遺傳多樣性分析等方面分別進(jìn)行相關(guān)研究，并與植物學(xué)形態(tài)標(biāo)記相比較，以達(dá)到揭示芒果遺傳特征的目的，為新品種的選育提供參考依據(jù)。結(jié)果如下：
　　 1、通過(guò)對(duì)SDS法、CTAB法和改良CTAB法獲取芒果DNA方法比較分析可知：改良CTAB法獲得DNA效果較好；SDS法獲得的DNA

3、效果較差，芒果的ISSR分析不適合用于此方法。
　　 2、適合于芒果ISSR-PCR分析的優(yōu)化反應(yīng)體系和擴(kuò)增程序?yàn)椋鹤罴逊磻?yīng)程序：94℃預(yù)變性5min、94℃變性60s、（退火溫度隨引物不同而定）50s、72℃延伸60s、循環(huán)35次、72℃最后延伸7min、10℃保存；20μl體系中，DNA模板濃度75ng/μl、dNTPs濃度0.25mmol/L、引物濃度0.20mmol/L、Taq酶濃度0.25Uμ/l、10×PCR Buf

4、fer加2μl、雙蒸水補(bǔ)至20μl，混勻后擴(kuò)增。
　　 3、從18條引物中篩選出4條引物（UBC-851，UBC-856，UBC-857，UBC-868），對(duì)97-1實(shí)生苗疑是親本進(jìn)行ISSR-PCR分析，結(jié)果證明：97-1實(shí)生苗的父母本分別為四川紅芒和紫花芒。
　　 4、采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)芒果紅色和黃綠色品種類(lèi)群進(jìn)行分析，結(jié)果表明：從50條引物中篩選出5條引物（UBC-840，UBC-857，UBC-864，U

5、BC-868，UBC-890）共擴(kuò)增出51條帶，其中多態(tài)性條帶41條，多態(tài)率達(dá)到80.4％，條帶的大小分布在400bp-3200bp之間。聚類(lèi)分析結(jié)果，以0.78作為相似系數(shù)分界點(diǎn)，8個(gè)芒果品種分為2個(gè)大類(lèi)；凱特芒、愛(ài)文芒、紅芒6號(hào)（紅色品種類(lèi)群）為一類(lèi)；臺(tái)農(nóng)1號(hào)、金煌芒、四季蜜芒、金穗芒、桂熱82（黃綠色品種類(lèi)群）為一類(lèi)。引物UBC-864可以將紅色品種類(lèi)群與黃綠色品種類(lèi)群完全區(qū)分開(kāi)。
　　 5、通過(guò)對(duì)97-1實(shí)生苗、紫花芒、

6、疑是親本四川紅芒的枝條、葉片顏色動(dòng)態(tài)變化觀察對(duì)比分析可知：97-1實(shí)生苗枝條、葉片的顏色性狀更接近于四川紅芒枝條、葉片的顏色性狀。依據(jù)形態(tài)標(biāo)記，推測(cè)實(shí)生苗的父本來(lái)自四川紅芒，果皮顏色可能表現(xiàn)紅色性狀。
　　 6、從紅色品種類(lèi)群和黃綠色品種類(lèi)群枝條、葉片顏色動(dòng)態(tài)變化觀察對(duì)比分析可知，不同品種的枝條，葉片的顏色指數(shù)與果實(shí)的顏色呈現(xiàn)出相關(guān)的規(guī)律性?？梢栽谝欢ǔ潭壬?，用于品種顏色的區(qū)分和雜交后代果皮顏色推論。
　　 7、不同顏色