粗毛淫羊藿愈傷組織的誘導(dǎo)及細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系的建立.pdf

1、本文以粗毛淫羊藿幼葉為外植體材料，利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，對(duì)其進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，繼代培養(yǎng)，懸浮培養(yǎng)的研究，篩選出適宜的培養(yǎng)條件，以建立高效的懸浮培養(yǎng)體系為目的，為粗毛淫羊藿野生資源保護(hù)而建立高效大規(guī)模的淫羊藿黃酮離體生產(chǎn)提供技術(shù)基礎(chǔ)。所得主要結(jié)果如下：
　　1.愈傷組織誘導(dǎo)階段，通過(guò)研究不同滅菌劑、消毒處理?xiàng)l件、不同培養(yǎng)基、不同激素配比、不同光照條件對(duì)粗毛淫羊藿愈傷組織誘導(dǎo)的影響，并用紫外分光光度法測(cè)定愈傷組織中總黃酮的含量。結(jié)果表

2、明：利用粗毛淫羊藿幼葉進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)，用2％的NaClO消毒14min,接種于培養(yǎng)基MS+2,4-D2.0mg/L+6-BA0.5mg/L+IBA0.5mg/L+NAA1mg/L,在24℃1000lx光照強(qiáng)度條件下進(jìn)行誘導(dǎo)效果最好，繼代和保存在黑暗條件下進(jìn)行最為適宜。誘導(dǎo)出的胚性愈傷組織總黃酮含量較高（5.38%），與野生粗毛淫羊藿總黃酮含量想當(dāng)，也高于藥典規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)（5.0%）。
　　2.愈傷組織的繼代培養(yǎng)階段，研究了不同培養(yǎng)

3、基、不同激素種類和濃度對(duì)愈傷組織的影響。結(jié)果表明：粗毛淫羊藿幼葉愈傷組織最佳繼代培養(yǎng)為MS+2,4-D2.0mg/L+6-BA0.5mg/L+IBA0.5mg/L+NAA1mg/L,且粗毛淫羊藿愈傷組織生長(zhǎng)曲線呈S型，最佳繼代周期應(yīng)在27d內(nèi)進(jìn)行。
　　3.懸浮培養(yǎng)體系建立階段，分別以細(xì)胞生長(zhǎng)率、總黃酮含量、淫羊藿苷含量為指標(biāo)，研究了初始接種量、搖床轉(zhuǎn)速、蔗糖濃度、基本培養(yǎng)基、激素配比和培養(yǎng)基初始pH值等因素對(duì)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系的影

4、響，同時(shí)對(duì)懸浮培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線的測(cè)定和總黃酮含量的積累進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：最適懸浮培養(yǎng)條件是以MS為培養(yǎng)基，不含瓊脂，配制成液體培養(yǎng)基，在每瓶含有25mL培養(yǎng)液的100mL三角瓶中接入2.0g愈傷組織，蔗糖濃度為30g/L，搖床轉(zhuǎn)速為120rpm，25℃，激素濃度配比為2,4-D（2mg/L)、6-BA（0.5mg/L）、NAA
　?。?.5mg/L)，初始pH為5.8。在上述環(huán)境下對(duì)粗毛淫羊藿懸浮細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，測(cè)得