河北小尾寒羊多脊椎調(diào)控基因Btg2和NR6A1的多態(tài)性分析.pdf

1、多脊椎現(xiàn)象是存在于河北小尾寒羊中的有益突變，多數(shù)突變都會(huì)引起綿羊脊柱的加長和體尺增加，從而顯著提高產(chǎn)肉量。本論文采用PCR-RFLP、Dcaps、PCR-SSCP以及直接測序等技術(shù)首次從分子水平上對小尾寒羊的Btg2基因和NR6A1基因的多態(tài)性與多脊椎性狀的關(guān)系進(jìn)行研究，以期找到與小尾寒羊多脊椎突變相關(guān)的分子遺傳標(biāo)記，并為進(jìn)一步標(biāo)記輔助選擇提高河北小尾寒羊的肉用性能，培育我國肉用綿羊品種奠定基礎(chǔ)。
　　 根據(jù)牛和豬的Btg2基因

2、的DNA序列，選擇保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增綿羊Btg2基因的外顯子3和3′UTR的部分序列，并對這些序列選取代表性個(gè)體進(jìn)行測序，得到長度為1226bp的片段。全部片段測序結(jié)果經(jīng)過同源性比對，共發(fā)現(xiàn)4個(gè)SNPs位點(diǎn)，突變位點(diǎn)依據(jù)拼接序列來命名分別為：A150G、C243T、A607G和T704C，其中有1個(gè)SNPs位于外顯子，未引起氨基酸序列的改變。
　　 應(yīng)用PCR-RFLP及Dcaps技術(shù)，對Btg2基因的A150G、C243T

3、和A607G突變位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增和群體檢測。獨(dú)立性卡方檢測結(jié)果表明150位點(diǎn)的不同表型個(gè)體基因型頻率差異不顯著（P>0.05）；243位點(diǎn)的差異極顯著（P<0.01），卡方檢驗(yàn)再分割結(jié)果表明，基因型頻率在T14L6與T14L7、T14L5表型之間差異極顯著，T14L6與T13L7之間差異顯著；607位點(diǎn)的差異呈顯著水平（P<0.05），卡方檢驗(yàn)再分割表明基因型頻率在T14L6與T14L7中差異顯著。結(jié)果表明243位點(diǎn)、60

4、7位點(diǎn)可能與多脊椎性狀有關(guān)。經(jīng)過獨(dú)立性卡方檢驗(yàn)，表明單體型在不同表型中差異顯著（P<0.05），分析表明單體型GTA可能與多脊椎性狀有關(guān)。
　　 根據(jù)牛和豬的NR6A1基因的DNA及Mrna序列，設(shè)計(jì)8對引物，擴(kuò)增綿羊的該基因的全部編碼區(qū)序列。運(yùn)用PCR-SSCP以及直接測序技術(shù)對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行突變篩查，結(jié)果在外顯子5的第25位堿基處上檢測到1個(gè)T25G的單堿基突變，該突變未引起氨基酸序列的改變。對該位點(diǎn)進(jìn)行群體檢測分型，經(jīng)獨(dú)立性