蘋(píng)果MdBAK1s基因表達(dá)載體構(gòu)建、愈傷轉(zhuǎn)化與蘋(píng)果輪紋病抗性鑒定.pdf

1、BAK1是植物中重要的一類激酶受體。擬南芥中的研究表明：BAK1介導(dǎo)植物油菜素內(nèi)酯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、先天性免疫反應(yīng)以及病原菌致毒蛋白對(duì)植物的毒性。蘋(píng)果中的MdBAK1s與擬南芥中的BAK1具有很高的相似性，而目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)BAK1在蘋(píng)果抵抗重要病害中的作用及其在生長(zhǎng)發(fā)育中的作用研究很少，為此，本研究中，我們克隆了蘋(píng)果中BAK1的2個(gè)同源基因，分別命名為：MdBAK1-1、MdBAK1-2，并對(duì)其進(jìn)行氨基酸序列分析。分別對(duì)愈傷組織超表達(dá)后生長(zhǎng)量的

2、變化，對(duì)BR處理的影響，抗病性及抑制表達(dá)后對(duì)MAPK的信號(hào)響應(yīng)等問(wèn)題展開(kāi)了相關(guān)研究，這將為進(jìn)一步研究MdBAK1s在蘋(píng)果生長(zhǎng)發(fā)育以及抗病中的作用奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　1.以嘎啦組培苗為材料克隆獲得蘋(píng)果中 BAK1的兩個(gè)同源基因，分別命名為：MdBAK1-1、MdBAK1-2，氨基酸序列分析表明：MdBAK1-1、MdBAK1-2與擬南芥BAK1的序列高度保守，相似度分別為83％、84%，其中胞內(nèi)激酶區(qū)域的保守性更高，均

3、為90%。并且都具有信號(hào)肽區(qū)域、亮氨酸拉鏈區(qū)域、5個(gè)亮氨酸富含區(qū)域、脯氨酸富含區(qū)、跨膜區(qū)以及胞內(nèi)激酶區(qū)。
　　2.獲得了穩(wěn)定超表達(dá) MdBAK1s的轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果愈傷組織與轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果株系，并初步觀察其表型特征，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果植株長(zhǎng)勢(shì)較弱，部分葉片會(huì)隨著生長(zhǎng)發(fā)黃。
　　3.應(yīng)用RNA干擾的方法抑制蘋(píng)果中MdBAK1s基因的表達(dá)，并獲得MdBAK1s表達(dá)受抑制的轉(zhuǎn)基因愈傷組織，初步觀察其表型特征，發(fā)現(xiàn)表達(dá)受抑制的轉(zhuǎn)基因愈傷組織顏色與

4、對(duì)照相比較淺。
　　4.研究了超表達(dá) MdBAK1s的轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果愈傷組織與對(duì)照愈傷組織在不同時(shí)期生長(zhǎng)量的差異，結(jié)果表明生長(zhǎng)15 d后超表達(dá)MdBAK1-1的轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果愈傷組織的生長(zhǎng)量明顯高于對(duì)照，是對(duì)照生長(zhǎng)量的2.3倍。
　　5.研究了在不同濃度BR處理下超表達(dá)MdBAK1s的轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果愈傷組織與對(duì)照愈傷組織生長(zhǎng)量的差異，結(jié)果表明當(dāng)BR濃度為1.0 nmol/L時(shí)可促進(jìn)蘋(píng)果愈傷的生長(zhǎng)，隨著B(niǎo)R濃度的不斷增加會(huì)抑制蘋(píng)果愈傷的生

5、長(zhǎng)，但當(dāng) BR濃度為1000 nmol/L時(shí)，超表達(dá)MdBAK1s的轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果愈傷組織的生長(zhǎng)量比普通愈傷明顯減少。
　　6.研究了超表達(dá) MdBAK1s的轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果愈傷組織與對(duì)照愈傷組織對(duì)輪紋病菌的抗性，結(jié)果表明超表達(dá)MdBAK1s的轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果愈傷組織更易感病。
　　7.研究了MdBAK1s表達(dá)受抑制的轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果愈傷組織與對(duì)照愈傷組織在flg22處理下響應(yīng)flg22信號(hào)的指示性蛋白MAPK6的表達(dá)差異，結(jié)果表明MdBAK1s