乙肝表面抗原大蛋白（S1S2S）基因三種不同表達(dá)載體轉(zhuǎn)化蘋果和番茄的研究.pdf

1、乙肝表面抗原大蛋白(Sls2s)基因三種不同表達(dá)載體轉(zhuǎn)化蘋果和番茄的研究摘要本文通過(guò)進(jìn)一步對(duì)乙肝表面抗原大蛋白(SIS2S)基因轉(zhuǎn)化蘋果和番茄的離體再生體系、遺傳轉(zhuǎn)化體系及轉(zhuǎn)化方法等方面的研究，建立了高效遺傳轉(zhuǎn)化體系，獲得了攜帶$1S2S基因的轉(zhuǎn)基因植株，并對(duì)其進(jìn)行了GUS染色鑒定和PeR檢測(cè)研究結(jié)果如下：1、優(yōu)化了蘋果品種‘涼香季節(jié)’的離體再生體系及遺傳轉(zhuǎn)化體系；通過(guò)根癌農(nóng)桿茵介導(dǎo)法將三種不同啟動(dòng)子調(diào)控的乙肝表面抗原大蛋白(S1S2S

2、)基因分別導(dǎo)入‘涼香季節(jié)’中，獲得轉(zhuǎn)化植株。研究結(jié)果表明：‘涼香季節(jié)’組培苗葉片基部最適宜農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化；葉片及組培苗卡那霉素選擇壓分別為15mg／L和25mg／L；抗生素cb較Cef抑菌效果更好；GUS染色呈陽(yáng)性的轉(zhuǎn)基因蘋果株系經(jīng)PCR擴(kuò)增，得到三種載體共有7個(gè)株系呈陽(yáng)性(其中AG208有2個(gè)株系；AG206有3個(gè)株系；ATll0有2個(gè)株系)，初步證實(shí)S1S2S基因已整合到蘋果‘涼香季節(jié)’的基因組。2，應(yīng)用超聲波輔助農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，對(duì)蘋果

3、‘紅愛(ài)佳’進(jìn)行SIS2S基因轉(zhuǎn)化。利用gus基因瞬時(shí)表達(dá)的方法研究了超聲波處理時(shí)間、處理時(shí)期、處理功率、外植體類型的處理和農(nóng)桿菌懸浮液中As濃度對(duì)SIS2S基因轉(zhuǎn)化率的影響。研究結(jié)果表明：當(dāng)農(nóng)桿菌浸染‘紅愛(ài)佳’葉片4min后，用功率為90W的超聲波處理30s，然后接種于再生培養(yǎng)基上共培養(yǎng)3天，能獲得最佳的gus基因瞬時(shí)表達(dá)率。最佳處理?xiàng)l件下轉(zhuǎn)化約600個(gè)‘紅愛(ài)佳’葉片，共得到138個(gè)抗性愈傷組織和11株坑性苗，轉(zhuǎn)化率為183％。3，以番

4、茄品種‘江蔬1號(hào)’為試材，Ms為基本培養(yǎng)基，研究了70％酒精和20／次氯酸鈉溶液的不同時(shí)間處理組合對(duì)其種子表面消毒效果和萌發(fā)的影響及不同基因型、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的種類及其濃度組合等因素對(duì)番茄子葉再生的影響。用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將S1S2S基因三種載體分別導(dǎo)入，并獲得了相應(yīng)的卡那霉素抗性苗，對(duì)其進(jìn)行了GUS組織化學(xué)染色鑒定及PCR檢測(cè)。研究結(jié)果表明：70％酒精處理50s后，再用20％次氯酸鈉溶液浸泡30min，‘江蔬1號(hào)’獲得98％的萌芽率：不

5、同的番茄品種在相同的培養(yǎng)基上其愈傷組織誘導(dǎo)率和不定芽的分化率存在著顯著差異，適于‘江蔬1號(hào)’子葉再生的培養(yǎng)基為MSZTO5mg／LIhh03mg／L，MSNAAO5mg／L為其適宜的生根培養(yǎng)基；對(duì)‘江蔬1號(hào)’進(jìn)行農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化后獲得了轉(zhuǎn)基因株系(AG208有71個(gè)株系、AG206有55個(gè)株系、ATll0有39個(gè)株系)，PeR檢測(cè)后得到AG208和AG206各有1個(gè)株系呈陽(yáng)性。關(guān)鍵詞：蘋果；番茄；S1S2S基因；根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)；超聲波輔助介導(dǎo)

6、；分子鑒定VInadditiontothat，thisthesisalsostudiedtheeffectsofdifferentgenetypes，thevarietyandconcentrationcombinationsofplantgrowthregulatedsubstanceontheregenerationoftomatocotyledonWein舡oducedthreevectorsofS1S2Sgeneintothep

7、lantbyAgrobacteriummediatedmethodandgotcorrespondingkanamyeinyoungplantsThetransgenieplantsweretestedbyGUSstainingandPCRassayTheseresultsshowedthatusing70％alcoholtotreat50seconds，thenused20％NaCIOsolutionstodip30minutes，‘

8、JiangsuNo1’Sgerminationratewas98％andnocontamination；DifferenttomatocultivarshadsignificantdifferenceincallusinducementrateandinfinitivebuddifferentiationrateatthesamemediumThesuitedmediumforcotyledonregenerationWasMSZT05

9、mg／I^IAA03m以ThesuitedmediumforrootgenerationWasMSNAA05mg／LThetransgcvicplantsof“JiangsuNo1’throughAgrobacteriwntransfommtion(71plantswithAG208，55plantswithAG206，39plantswithATllo)containedonlyonepositiveplantofAG208andAG