極地微生物對龍膽苦苷和芍藥苷的生物轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、微生物轉(zhuǎn)化就是利用微生物代謝過程中產(chǎn)生的酶對外源物質(zhì)進行結(jié)構(gòu)修飾和改造的化學(xué)反應(yīng)。與化學(xué)方法相比，它具有選擇性高、條件溫和、無污染、成本低、副產(chǎn)物少等優(yōu)點。利用微生物作為生物催化劑可以對天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)進行結(jié)構(gòu)修飾，得到一些結(jié)構(gòu)新穎的化合物，以供藥物篩選之用。同時，微生物轉(zhuǎn)化也常常作為代謝研究的一種重要工具，在體外預(yù)測藥物在動物體內(nèi)代謝的情況。
　　多種研究表明，糖苷類藥物需經(jīng)微生物轉(zhuǎn)化為苷元后方能產(chǎn)生藥效，利用微生物發(fā)酵過程中產(chǎn)生

2、的酶系，建立苷類藥物體外轉(zhuǎn)化模型，將苷類物質(zhì)轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的苷元，能有效提高活性成分的生物利用度。已有研究報道β-D-葡萄糖苷酶在龍膽苦苷和芍藥苷的生物轉(zhuǎn)化過程中起到非常重要的作用。所以，本文首先將來源于極地區(qū)域的土壤樣品為供試土樣，通過土壤微生物分離方法，借助七葉靈顯色反應(yīng)，從極地土樣中分離出若干株產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的真菌菌株，用于后續(xù)的微生物轉(zhuǎn)化實驗。
　　其次，本研究分別以龍膽苦苷和芍藥苷為底物，利用上述分離出的真菌菌株進行微生物

3、轉(zhuǎn)化篩選，發(fā)現(xiàn)菌株Z1-4的轉(zhuǎn)化效率最高。在此基礎(chǔ)上將反應(yīng)規(guī)模擴大，乙酸乙酯萃取濃縮，硅膠柱和葡聚糖凝膠分離多次純化，并用核磁共振、液質(zhì)聯(lián)用等技術(shù)對其結(jié)構(gòu)進行了鑒定。其中龍膽苦苷得到兩個轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，其中一個為新化合物;芍藥苷的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物鑒定出底物結(jié)構(gòu)上脫離的苯甲酸，其他轉(zhuǎn)化產(chǎn)物還需進一步的鑒定。
　　綜合菌株Z1-4的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果和真菌18S、ITS分子生物學(xué)鑒定技術(shù)，發(fā)現(xiàn)Z1-4的18S序列與Genbank數(shù)據(jù)庫ABD48284.