利用天麻抗真菌蛋白基因（gafp）培育抗枯、黃萎病陸地棉的研究.pdf

1、本研究首先通過花粉管通道轉(zhuǎn)化法，將天麻抗真菌蛋白(GAFP)的基因gafp轉(zhuǎn)入3個(gè)新疆陸地棉栽培品中(系)中，然后將所獲得的轉(zhuǎn)化植株后代在棉花枯、黃萎病混生病圃中進(jìn)行抗病鑒定，通過篩選試圖獲得對黃、枯萎病的有顯著抵抗能力的棉花新材料。主要研究結(jié)果如下：　　1、優(yōu)化了現(xiàn)有的花粉管通道法轉(zhuǎn)化棉花的技術(shù)體系。為了提高花粉管通道法轉(zhuǎn)化棉花的頻率，研究了影響轉(zhuǎn)化效率因素。發(fā)現(xiàn)進(jìn)行注射的最佳時(shí)間為授粉后15～25小時(shí)，最適注射部位為棉花子房中座，

2、質(zhì)粒DNA的注射量為0.02～0.04ug/ul?！　?、進(jìn)行了陸地棉植株抗生素涂抹敏感性實(shí)驗(yàn)，確定了篩選的適宜濃度，卡那霉素涂抹篩選濃度為0.75～1.00％(w/v)。將所獲得的轉(zhuǎn)化后代在大田種植后經(jīng)卡那霉素標(biāo)記基因抗性篩選，獲得抗性植株58株。　　3、將所得到的抗卡那霉素58株陽性植株經(jīng)枯、黃萎病混生病圃抗病性調(diào)查和鑒定、Southern點(diǎn)雜交及PCR擴(kuò)增檢測，證實(shí)得到了2株高抗枯、黃萎病的轉(zhuǎn)基因植株。其后代經(jīng)過進(jìn)一步的抗病性