魚類白介素4及其受體IL-4Rα的分子鑒定與功能研究.pdf

1、論文以模式生物斑馬魚作為研究對(duì)象，開展了魚類白介素-4(interleukin-4，IL-4)及其受體IL-4Rα的分子克隆與功能研究。
　　 論文第一部分為緒論部分，主要分兩個(gè)部分介紹了IL-4及其特異性受體IL-4Rα的研究近況。第一部分介紹了IL-4的發(fā)現(xiàn)、基因克隆、基因結(jié)構(gòu)，表達(dá)調(diào)控機(jī)制、受體的組成、生物學(xué)功能以及相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)途徑等方面的研究結(jié)果和進(jìn)展；第二部分主要介紹了IL-4Rα的基因克隆、表達(dá)調(diào)控、信號(hào)傳導(dǎo)、選擇剪

2、接形式及生物學(xué)功能等方面的研究進(jìn)展。IL-4Rα和IL-4是高度親和的一對(duì)特異性相互作用的分子，兩者的親和作用對(duì)發(fā)揮IL-4的生物學(xué)功能起到了非常重要的作用。
　　 論文第二部分為實(shí)驗(yàn)部分。主要分為三個(gè)小節(jié)：第一小節(jié)，為斑馬魚IL-4基因的克隆、生物信息學(xué)分析以及組織分布的鑒定，同時(shí)利用原核表達(dá)系統(tǒng)得到可溶型的重組斑馬魚IL-4蛋白質(zhì)。利用生物信息學(xué)軟件，分析了斑馬魚IL-4分子在進(jìn)化上的規(guī)律，并且分析了其在進(jìn)化上與高等脊椎動(dòng)物

3、及其他物種的關(guān)系。第二部分，在斑馬魚中克隆得到了IL-4特異性受體IL-4Rα的基因，同時(shí)還克隆到一個(gè)IL-4Rα樣(IL-4Rα-L)的基因，與IL-4Rα基因座位相鄰，它與IL-4Rα基因在序列和結(jié)構(gòu)上存在高度的同源性，最大的區(qū)別是IL-4Rα-L缺失大部分的胞內(nèi)區(qū)，同時(shí)兩者通過選擇性剪接均得到一個(gè)可溶形式的蛋白。我們對(duì)這四個(gè)分子進(jìn)行了其在斑馬魚中組織分布的規(guī)律的研究，同時(shí)在原核表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)并純化得到可溶性的IL-4Rα蛋白質(zhì)，并

4、制備得到多克隆抗體。利用生物信息學(xué)軟件，對(duì)IL-4Rα及其IL-4Rα-L與其他物種中的IL-4Rα進(jìn)行分析比對(duì)，發(fā)現(xiàn)IL-4Rα在基因結(jié)構(gòu)，基因共線性，蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象，蛋白質(zhì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的結(jié)合位點(diǎn)等各方面都是相當(dāng)保守的。第三部分，我們對(duì)IL-4/IL-4Rα進(jìn)行了功能分析，提供了IL-4和IL-4Rα作為一對(duì)特異性互作分子的證據(jù)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)IL-4能刺激B細(xì)胞增殖，對(duì)抗體產(chǎn)生起上調(diào)作用，并且鑒定了IL-4提高Th2類細(xì)胞因子及轉(zhuǎn)錄因子的表