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文檔簡介
1、沙門氏菌是引起人類食物中毒的主要病原菌之一,對人和動物均有致病性。在世界范圍內(nèi),沙門氏菌污染肉類和蛋類引起的食物中毒仍占有很高的比例。
金黃色葡萄球菌能引起多組織的感染,如引起菌血癥、心內(nèi)膜炎和肺炎等,由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒其危害程度僅次于沙門氏菌屬,是主要的食品污染細菌。
免疫磁珠是指包被有相關(guān)免疫配基(-NH2,-COOH等)的磁性微粒,利用抗原抗體反應(yīng)的特異性地從混合液中分離靶物質(zhì),具有高度專一
2、性、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備等特點。食品中沙門氏菌的檢驗主要用分離培養(yǎng)方法,由于污染量少,常規(guī)檢驗時必須進行增菌培養(yǎng)以提高檢出率,因而耗時較長,檢出率較低,難以在現(xiàn)場進行即時的快速檢驗。本研究應(yīng)用免疫磁性分離技術(shù)及抗體制備技術(shù),希望能從污染菌很少的樣品中快速富集細菌,用集菌的方法代替增菌培養(yǎng),以提高沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的檢出率,縮短檢驗時間,為市場檢疫提供更為便捷的快速檢驗方法。
1.腸炎沙門氏菌高免血清的制備將
3、腸炎沙門氏菌(Salmonellaenteritidis,SE)免疫原與弗氏佐劑乳化后免疫家兔和雞,得到抗腸炎沙門氏菌的高免血清。分別經(jīng)飽和硫酸銨粗提、G-200過柱純化和辛酸-硫酸銨鹽析法純化,獲得了兔抗SE和雞抗SE的多克隆純化抗體IgG,為應(yīng)用免疫磁珠技術(shù)富集腸炎沙門氏菌方法的建立奠定了基礎(chǔ)。
2.免疫磁珠技術(shù)富集腸炎沙門氏菌和免疫磁珠的保存利用化學(xué)共沉淀的方法合成了磁性微粒,粒徑約為30~100nm,對其表面進行硅
4、烷化和醛基化修飾。使用抗SE的多克隆抗體包被修飾后的磁性微粒,確定了磁珠與多克隆抗體的偶聯(lián)條件。試驗結(jié)果表明:使用200μ.L免疫磁珠與菌液作用30min即可從樣品中富集到腸炎沙門氏菌,靈敏度高達3cfu/mL。該技術(shù)要優(yōu)于傳統(tǒng)的細菌分離培養(yǎng)方法。
分別采取凍干法和冷藏法直接保存免疫磁珠,在不同的條件下保存一定時間后進行吸附試驗,結(jié)果表明凍干法保存的磁珠吸附能力降低,故不選用凍干法保存磁珠。在直接冷藏保存組中,加保護劑的免
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