不同血清型副雞嗜血桿菌差異的比較.pdf

1、副雞嗜血桿菌是引起雞傳染性鼻炎的病原體,分為A、B、C三個(gè)血清型,本菌兼性厭氧,可以引起急性呼吸道病?？蓪?dǎo)致蛋雞產(chǎn)蛋率和孵化率下降,從而造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
　　 目的:通過(guò)研究不同血清型副雞嗜血桿菌在生長(zhǎng)特性、致病性、敏感性和外膜蛋白方面的差異,為臨床診療、B型菌疫苗的研制和從蛋白組學(xué)進(jìn)一步研究該菌提供了技術(shù)保障。
　　 方法:將菌種在TSA培養(yǎng)基上厭氧培養(yǎng)24h,然后挑取單個(gè)菌落在TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)16h,待培養(yǎng)基變

2、渾濁時(shí)開(kāi)始測(cè)OD600,每隔2h測(cè)一次,進(jìn)行記錄。將117只未接種過(guò)傳鼻疫苗的蛋雞分為三組,每只雞眶下竇注射已培養(yǎng)12h的菌液0.25ml,每一組攻一個(gè)血清型,24h后開(kāi)始觀察發(fā)病情況。將125、62.5、32、16、8 mg／ml連翹提取物分別加入到已有10ml液體培養(yǎng)基的試管后,再向每管中接入已活化的對(duì)應(yīng)菌0.1ml,將試管置于37℃恒溫?fù)u床中培養(yǎng),每間隔2h測(cè)定并記錄OD600值。將已培養(yǎng)好的菌液進(jìn)行冰浴、離心、重懸、超聲破碎等提

3、取其外膜蛋白,然后將外膜蛋白進(jìn)行等電聚焦、SDS-PAGE,得到不同血清型的雙向電泳圖。
　　 結(jié)果:通過(guò)生長(zhǎng)特性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),B和C型副雞嗜血桿菌的OD600在12h到達(dá)最高峰,而A型菌則在10h到達(dá)高峰,然后開(kāi)始下降。通過(guò)致病性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),C型菌的持續(xù)感染能力最強(qiáng),B型菌次之,A型菌最弱。通過(guò)對(duì)藥物敏感性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),A、B型菌的最佳抑菌濃度為32mg／ml,而C的為16mg／ml。通過(guò)不同血清型外膜蛋白的雙向電泳圖發(fā)現(xiàn),不同血清型外