經(jīng)鴨胚傳遞的鴨副黏病毒分子生物學(xué)特性研究.pdf

1、鴨副黏病毒病(鴨源新城疫)是由鴨副黏病毒(鴨源新城疫病毒)引起的一種急性敗血性傳染病。該病以腹瀉和神經(jīng)癥狀,腺胃黏膜局灶性出血或潰瘍,腸道黏膜出血及胰腺或脾臟有白色壞死點為主要特征。鴨發(fā)病日齡多集中在5—8周齡,發(fā)病率和死亡率分別可達(dá)20％-60％和10％-15％,個別鴨群兩者均高達(dá)90％以上。一般認(rèn)為副黏病毒主要通過病禽的胴體、內(nèi)臟、排泄物或分泌物以及污染的飼料、水源、草地、用具等經(jīng)消化道、呼吸道或眼結(jié)膜進(jìn)行水平傳播。2008年本實驗

2、室從表現(xiàn)疑似副黏病毒病癥狀的一日齡雛鴨和死亡鴨胚中分離到一株病毒,通過生物學(xué)特性試驗、RT-PCR方法擴增F基因片段確定分離毒株為副黏病毒。因此我們推測鴨副黏病毒可以經(jīng)胚蛋垂直傳播。
　　 本研究對2008—2009年表現(xiàn)類似副黏病毒病癥狀的一日齡雛鴨和死亡鴨胚進(jìn)行了副黏病毒的分離鑒定,對分離到的4株鴨副黏病毒進(jìn)行了生物學(xué)特性和遺傳特性研究。致病指數(shù)MDT和ICPI測定結(jié)果分別為50.4-58.0h和1.68-1.75,表明分離

3、株均為強毒株。致病性試驗顯示,代表毒株對不同日齡雛鴨均具有較強的致病性,發(fā)病率和死亡率分別達(dá)70％-100％和20％-100％。采用RT-PCR對4株分離株F基因進(jìn)行擴增和序列分析,結(jié)果表明,分離毒株間同源性在99.8％-100％,與本實驗室之前從肥城地區(qū)1日齡雛鴨中分離到的SDFCH株同源性最高為99.5％-99.8％,與其他鴨源、雞源、鵝源、鴿源NDV同源性分別為88.1％-98.4、88.4％-98.7％、88.6％-97.6％和

4、90.8％-94.8％；遺傳進(jìn)化分析表明,4株鴨副黏病毒與SDFCH位于同一分支,均屬于基因Ⅶd型。分離毒株與SDFCH株間高度同源,遺傳關(guān)系高度相近,推測可能與這些毒株經(jīng)鴨胚傳遞有關(guān)。
　　 根據(jù)GenBank中發(fā)表的NDV病毒全基因組序列,共設(shè)計合成了19對引物,采用RT-PCR方法對分離毒株SDWF02全基因組進(jìn)行擴增和序列分析。結(jié)果表明,SDWF02全長15192bp,在NP基因5’非編碼區(qū)存在6bp插入,與GenBan

5、k上公布的NDV基因Ⅴ-Ⅶ、Ⅸ型全基因組長度相同,包含3’前導(dǎo)序列、5’尾隨序列和6個開放閱讀框,基因排列順序為3’-NP-P-M-F-HN—L-5’。SDWF02基因3’端前12個核苷酸與5’末端12個核苷酸互補配對,各基因起始、終止序列與其他NDV相應(yīng)序列高度同源,NP—P、P-M、M-F、F-HN、HN-L各基因間區(qū)的序列長度依次為1bp、1bp、1bp、31bp和47bp。同源性分析結(jié)果表明,SDWF02與近幾年國內(nèi)外分離的基因

6、Ⅶ型雞源GM、chicken/China/Guangxi9/2003、chicken/China/Guangxi11/2003,鴨源Muscovy duck/China(Fujian)/FP1/02、Laying duck/JSD0812/2008,鵝源ZJ1、SF02同源性較高,在97.0％-97.3％之間；與其他基因型NDV毒株及傳統(tǒng)Lasota、F48E9、Mukteswar等同源性較低僅為82.8％-89.1％。此外,與其他毒株