WSSV-VP37和VP31核酸疫苗對對蝦的免疫保護效果及VP90的表達研究.pdf

1、對蝦白斑綜合癥病毒(white spot syndrome virus，WSSV）自1992年首次暴發(fā)以來對全球蝦類養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重危害，是廣受關(guān)注的甲殼類病毒新種(Whispovirus)。目前主要集中于尋找WSSV與宿主相結(jié)合的粘附蛋白上，從而研制相應(yīng)的阻斷疫苗以達到防治目的。
　　 本論文主要分為兩個部分：第一部分關(guān)于WSSV核酸疫苗的構(gòu)建，采用的是真核表達載體pEGFP-N1，含有綠色熒光蛋白標(biāo)簽便于檢測和定位，目的基因為

2、vp37和vp31。第二部分關(guān)于WSSV-VP90蛋白表達與功能的研究，原核表達VP90p片段，制備抗體進行功能研究。
　　 本實驗通過體外PCR擴增的方式，構(gòu)建pEGFP-N1-vp37、pEGFP-N1-vp31DNA疫苗，研究其對對蝦的免疫活性。首先通過細胞轉(zhuǎn)染的手段驗證了構(gòu)建的真核重組載體可以穩(wěn)定的在真核細胞中表達目的蛋白，然后采用注射和飼料添加投喂的方式免疫對蝦，通過分析對蝦體內(nèi)相關(guān)酶的活性變化及累計死亡率，驗證重組質(zhì)

3、粒的免疫保護效果。結(jié)果表明，VP37-80組免疫效果最好，相對免疫保護率37％左右，VP31組的相對免疫保護率為31％左右，飼料添加裸露的質(zhì)粒免疫保護效果低于注射免疫。
　　 此外利用生物信息學(xué)軟件分析VP90的功能區(qū)域，根據(jù)功能區(qū)域設(shè)計引物并引入Xhol和EcorⅠ酶切位點，通過體外PCR擴增手段成功構(gòu)建了原核表達載體pBAD/gⅢB-VP90P。通過發(fā)酵條件優(yōu)化得到最優(yōu)的發(fā)酵時間和誘導(dǎo)劑濃度為誘導(dǎo)4h，誘導(dǎo)濃度為0.02％。