CAPN1基因?qū)﹄u肌肉嫩度性狀的遺傳效應(yīng)及其表達(dá)規(guī)律研究.pdf

1、本試驗(yàn)選取我國廣東清遠(yuǎn)市的優(yōu)質(zhì)雞品種-清遠(yuǎn)麻雞和一個(gè)國外引進(jìn)雞品種-隱性白羽雞作為研究對(duì)象，將CAPN1基因作為影響雞肉嫩度性狀的候選基因，采用PCR-SSCP和測序相結(jié)合的方法，在清遠(yuǎn)麻雞和隱性白羽雞群體中對(duì)CAPN1基因進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性(SNPs)掃描并分析其與肌肉嫩度等肉質(zhì)性狀之間的關(guān)系；同時(shí)利用SYBR Green I熒光定量PCR法檢測了CAPN1基因在清遠(yuǎn)麻雞和隱性白羽雞胸肌和腓腸肌組織中的時(shí)空表達(dá)規(guī)律。試驗(yàn)結(jié)果如下：

2、r>　　 1.CAPN1基因多態(tài)性檢測。
　　 采用PCR-SSCP的方法對(duì)清遠(yuǎn)麻雞和隱性白羽雞CAPN1基因的編碼區(qū)序列及3′調(diào)控區(qū)部分序列進(jìn)行了SNPs檢測。結(jié)果在3對(duì)引物的擴(kuò)增序列中檢測到了多態(tài)性，分別為外顯子5中T2507C突變，C2546T突變，外顯子6中G3535A突變以及3′調(diào)控區(qū)的G9950A突變，位于編碼區(qū)的3個(gè)突變均沒有引起相應(yīng)氨基酸的改變，故均為沉默突變。統(tǒng)計(jì)了不同多態(tài)位點(diǎn)在不同品種中的基因型頻率和基因頻

3、率，發(fā)現(xiàn)基因型分布在不同品種中存在差異。外顯子5的多態(tài)位點(diǎn)在隱性白羽雞中發(fā)現(xiàn)了A、B2個(gè)等位基因和AA、AB、BB三種基因型，AA型為野生型，BB型在2546處存在C/T突變，其中B等位基因頻率(0.752)明顯高于A等位基因頻率(0.248)，在清遠(yuǎn)麻雞中則發(fā)現(xiàn)了A、B、C3個(gè)等位基因和AA、AB、BB、AC、BC、CC六種基因型，CC型個(gè)體同時(shí)存在T2507C突變和C2546T突變，其中C等位基因的頻率為0.188；3′調(diào)控區(qū)的多態(tài)

4、位點(diǎn)在兩個(gè)雞品種中均發(fā)現(xiàn)了G、A兩個(gè)等位基因和GG、GA、AA三種基因型，在清遠(yuǎn)麻雞群體中G等位基因的頻率(0.675)高于A等位基因頻率(0.325)，在隱性白羽雞群體中G等位基因的頻率(0.484)則略低于A等位基因頻率(0.516)；外顯子6在兩個(gè)雞品種中均發(fā)現(xiàn)了G、A兩個(gè)等位基因和GG、GA、AA三種基因型，在清遠(yuǎn)麻雞群體中G等位基因的頻率(0.190)明顯低于A等位基因頻率(0.810)，而在隱性白羽雞中則完全相反，G等位基因

5、的頻率(0.840)明顯高于A等位基因頻率(0.160)。
　　 2.CAPN1基因各SNPs位點(diǎn)與肉質(zhì)性狀的關(guān)系。
　　 不同品種、不同基因型的個(gè)體剪切力值最小二乘分析結(jié)果表明：在SNPC5位點(diǎn)上，存在顯著的品種效應(yīng)，在隱性白羽雞中存在顯著的基因型效應(yīng)，AB型和BB型個(gè)體的剪切力值顯著高于AA型(P＜0.05)，AB型個(gè)體剪切力值稍高于BB型個(gè)體，但兩者之間的差異不顯著；而清遠(yuǎn)麻雞中基因型效應(yīng)卻不顯著。在SNPC6位點(diǎn)

6、上，存在顯著的品種效應(yīng)，在隱性白羽雞中不存在顯著的基因型效應(yīng)；而在清遠(yuǎn)麻雞中，GA型和AA型個(gè)體的剪切力值顯著高于GG型(P＜0.05)。在SNPC3的多態(tài)位點(diǎn)上，品種效應(yīng)，基因型效應(yīng)以及品種與基因型之間的互作效應(yīng)均不顯著。
　　 不同品種、不同基因型的個(gè)體系水力值最小二乘分析結(jié)果表明：在SNPC5位點(diǎn)上，存在顯著的品種效應(yīng)，在隱性白羽雞中存在顯著的基因型效應(yīng)，AB型的系水力顯著高于BB型(P＜0.05)。在SNPC6和SNPC

7、3位點(diǎn)上均不存在顯著的品種效應(yīng)、基因型效應(yīng)以及品種與基因型之間的互作效應(yīng)。(注：SNPC3、SNPC5、SNPC6分別代表CAPN1基因3′調(diào)控區(qū)、外顯子5、外顯子6的SNP位點(diǎn)，下面同。)
　　 3.CAPN1基因在雞不同生長階段表達(dá)規(guī)律研究。
　　 在清遠(yuǎn)麻雞和隱性白羽雞的不同生長階段(0，2，4，6，8，10，12周齡)胸肌和腓腸肌組織中均檢測到了CAPN1基因的mRNA。在胸肌中，清遠(yuǎn)麻雞CAPN1基因表達(dá)水平高

8、于隱性白羽雞，但兩個(gè)雞品種各時(shí)期發(fā)育性變化規(guī)律趨于一致，且表達(dá)高峰均出現(xiàn)在6周齡；而在腓腸肌中清遠(yuǎn)麻雞2.5周齡以后的表達(dá)水平低于隱性白羽雞，2.5周齡以前略低于隱性白羽雞。兩個(gè)雞品種表達(dá)的變化趨勢顯示，以8周齡為分界線，8周齡以前兩者的表達(dá)水平呈現(xiàn)相反的變化趨勢，8周齡以后變化趨于一致，且清遠(yuǎn)麻雞的表達(dá)高峰是在2周齡，而隱性白羽雞的表達(dá)高峰出現(xiàn)在6周齡。
　　 同一雞品種在不同組織的表達(dá)水平對(duì)比結(jié)果顯示，兩個(gè)雞品種的對(duì)比結(jié)果類