苜蓿花藥懸浮培養(yǎng)體系的建立及其倍性鑒定的研究.pdf

1、苜?；ㄋ帒腋∨囵B(yǎng)體系的建立可為苜蓿體細胞雜交、遺傳轉(zhuǎn)化以及獲得苜蓿單倍體，建立苜蓿加倍單倍體群體（DH）提供快捷有效的途徑。本研究以自選系多葉0501×Sanditi、自選系大葉0510×Sanditi苜蓿雜交F1代的花藥愈傷組織為材料建立懸浮細胞系，并植株再生。通過探索苜蓿懸浮培養(yǎng)體系建立的基礎(chǔ)條件及其影響因素，建立適宜的苜?；ㄋ帒腋∨囵B(yǎng)體系，為創(chuàng)造苜蓿新種質(zhì)提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.不同基因型材料的愈傷組織誘導(dǎo)

2、率差異不大。2，4-D濃度為0.5mg/L時，經(jīng)過5次調(diào)控繼代、最后一次繼代20d左右的淡黃色或乳白色生長快、結(jié)構(gòu)疏松顆粒狀胚性愈傷組織，適宜建立胚性懸浮細胞系。
　　 2.參試苜蓿品種在NB液體培養(yǎng)基中愈傷組織誘導(dǎo)率較高；同一激素水平下，NB培養(yǎng)基愈傷組織誘導(dǎo)率明顯高于MS液體培養(yǎng)基。接種后，培養(yǎng)液pH值出現(xiàn)下降一上升一平穩(wěn)的趨勢。
　　 3.采用固-液培養(yǎng)基結(jié)合的方式建立苜?；ㄋ帒腋∨囵B(yǎng)體系?；疽后w培養(yǎng)基為NB培養(yǎng)

3、基，培養(yǎng)液最佳組合為NB+2，4-D0.3mg/L+NAA0.3mg/L，蔗糖2％-3％。苜?；ㄋ帒腋〖毎道^代周期為6d-8d時，有利于苜蓿胚性懸浮細胞系的建立與保持。
　　 4.懸浮培養(yǎng)條件下，溫度對懸浮細胞系有明顯的影響。溫度為30℃時，懸浮細胞系出現(xiàn)輕微的褐化現(xiàn)象；38℃時，懸浮細胞褐化現(xiàn)象趨于嚴重，并出現(xiàn)死亡。溫度為43℃、24h時，懸浮細胞系半數(shù)死亡。45℃、12h時，懸浮細胞系全數(shù)死亡。綜合以上可認為43℃為苜?；?/p>

4、藥懸浮系半致死溫度，45℃為致死溫度。苜?；ㄋ帒腋∨囵B(yǎng)高溫脅迫的研究可為苜蓿DH群體栽培適應(yīng)范圍的擴大提供理論依據(jù)。
　　 5.通過對懸浮培養(yǎng)細胞系愈傷組織誘導(dǎo)的研究表明，接種15d后出現(xiàn)淡黃色的小米粒狀的團粒結(jié)構(gòu)的愈傷組織。愈傷組織在分化培養(yǎng)基中可產(chǎn)生大量乳白色、膨大的不定芽。在以上兩過程中培養(yǎng)液顏色呈現(xiàn)淺紅棕色-棕紅色-淡紅棕色-米色-乳白色-無色的變化。
　　 6.倍性鑒定情況經(jīng)愈傷組織及根尖染色體計數(shù)法對花培植株