小麥葉片胞間液蛋白的分離分析研究.pdf

1、植物細(xì)胞間隙液蛋白在植物的生長(zhǎng)發(fā)育、抗病抗逆反應(yīng)等各種生物學(xué)過(guò)程中具有十分重要的作用，由于植物中的細(xì)胞間隙液蛋白質(zhì)含量低，而且細(xì)胞膜容易破損，所以其提取與分離工作難以有效開(kāi)展。本文旨在建立一種有效的適合小麥葉片細(xì)胞間隙液蛋白質(zhì)的提取方法，并運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)的多種研究方法對(duì)小麥葉片細(xì)胞間隙液蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，為開(kāi)展小麥葉片細(xì)胞間隙液蛋白質(zhì)在小麥生長(zhǎng)發(fā)育、抗病抗逆等方面的研究提供了新的研究方式。
　　 首先，本文篩選優(yōu)化出了較為合適的小

2、麥葉片細(xì)胞間隙液蛋白質(zhì)的提取方法。結(jié)果顯示：以50 mMNaAC作為提取緩沖液，負(fù)壓處理小麥葉片20 min，以40×g離心5 min除去提取緩沖液后，再以2000×g離心15 min收集細(xì)胞間隙液，可以得到較好的提取效果。收集細(xì)胞間隙液，冷凍干燥后，以SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)并分離小麥葉片細(xì)胞間隙液的蛋白質(zhì)。把SDS-PAGE分離所得的44條細(xì)帶分別切下并酶切后，進(jìn)行MALDI-TOF/TOF二級(jí)質(zhì)譜分析，共鑒定出27種蛋白質(zhì)，其

3、中有些蛋白質(zhì)是被報(bào)道過(guò)的定位于細(xì)胞間隙的蛋白質(zhì)。
　　 將小麥葉片全蛋白和細(xì)胞間隙液蛋白進(jìn)行二維電泳(2-DE)分離，重復(fù)三次取平均值，分別檢測(cè)到1247和522個(gè)蛋白點(diǎn)。而采用2D-DIGE技術(shù)分離全蛋白能夠檢測(cè)到1376個(gè)蛋白點(diǎn)，提高了定量的準(zhǔn)確性并能夠發(fā)現(xiàn)更多的蛋白點(diǎn)。
　　 高效液相色譜技術(shù)可以彌補(bǔ)SDS-PAGE以及2-DE技術(shù)的缺陷。為了最大范圍的分離分析細(xì)胞間隙液蛋白的成分，本文初步探索了HPLC技術(shù)分離小