棉花枯萎病菌致病力分化及遺傳多樣性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、棉花枯萎病(cotton fusarium wilt)是由尖孢鐮刀菌萎蔫?;?Fusariumoxysporum f.sp.vasinfectum)引起的棉花生產上危害最為嚴重的世界性病害之一。目前,世界上已經報道棉花枯萎病菌有8個生理小種,我國分布有3號、7號和8號生理小種,其中7號生理小種是我國棉花枯萎病菌的優(yōu)勢小種,其毒力強,分布廣,危害嚴重,且不同菌系間存在明顯的致病力分化。因此,明確棉花枯萎病菌的生理小種分布、致病力分化和菌

2、系內部的遺傳多樣性,可為棉花的抗病育種、品種的合理布局以及棉花枯萎病的綜合防治提供理論依據。
   本研究首先以棉花枯萎病菌3號、7號和8號生理小種標準菌株和3個供試棉花枯萎病菌菌株為材料,通過對酶切時間、預擴增模板濃度、選擇性擴增模板濃度進行梯度優(yōu)化試驗,建立了基于HaeⅢ/PstⅠ酶切的適合棉花枯萎病菌的AFLP技術體系,即酶切反應:250ng DNA經HaeⅢ/PstⅠ37℃酶切2h后,加入1μLPstⅠ再進行酶切2h;

3、連接反應:酶切產物25℃連接過夜(≥16h);PCR反應中,連接產物稀釋10倍(P10)作為預擴增模板,預擴增產物稀釋50倍(P10S50)作為選擇性擴增模板進行PCR擴增。利用優(yōu)化后的AFLP技術可將3號、7號和8號生理小種進行有效地區(qū)分。
   本研究利用AFLP技術對85個棉花枯萎病菌進行了遺傳多樣性分析,結果表明,棉花枯萎病菌不同菌株之間的遺傳距離在0.51~1.00之間,存在較高的遺傳多樣性。聚類分析表明,在0.51

4、的Dice相似系數水平上,供試的85個菌株被劃分為4個AFLP類群。AGsⅠ類群包括1個菌株Race3,為3號生理小種標準菌株;AGsⅡ類群包括1個菌株Race8,為8號生理小種標準菌株;AGsⅢ類群包括7號生理小種標準菌株和74個供試菌株,說明74個供試棉花枯萎病菌菌株為7號生理小種,同一小種內不同菌株之間存在一定的遺傳分化。AGsⅣ類群中包括8個菌株,不同于3號、7號和8號生理小種,與其他供試菌株的遺傳分化較大?;贏FLP多態(tài)性劃

5、分的類群表明,AFLP類群與生理小種之間存在一定相關性,與菌株的地理來源和致病力之間無明顯相關性。
   進一步對AGsⅣ類群中的8個菌株結合翻譯延伸因子(EF-1α)基因、β-微管蛋白(BT)基因和磷酸透性酶(PHO)基因序列進行了系統(tǒng)發(fā)育分析,結果表明8個菌株均為棉花枯萎病菌,其中5個菌株與澳大利亞的棉花枯萎病菌親緣關系最近,推測可能為疑似澳大利亞菌株的新基因型菌株。其它3個菌株與7號生理小種標準菌株在同一進化群中,為7號生

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