綿羊卵丘細(xì)胞中組織蛋白酶基因表達(dá)及其對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育能力影響.pdf

1、本研究利用Real-time PCR方法檢測(cè)成年綿羊和羔綿羊卵丘細(xì)胞中組織蛋白酶(CTSS、CTSB)mRNA的表達(dá)規(guī)律,并研究在成熟液中添加組織蛋白酶抑制劑E-64對(duì)組織蛋白酶mRNA的表達(dá)及其對(duì)卵母細(xì)胞受精后胚胎發(fā)育能力的影響,結(jié)果如下:
　　 綿羊卵丘細(xì)胞中CTSS、CTSB mRNA的表達(dá)水平隨著體外成熟時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降,成年綿羊卵丘細(xì)胞IVM24h的CTSS、CTSB mRNA表達(dá)水平較IVM oh分別下降了2倍和

2、5倍,羔綿羊則分別下降了2倍和6倍。羔綿羊卵丘細(xì)胞中CTSS、CTSB mRNA表達(dá)水平在成熟各時(shí)間點(diǎn)均極顯著高于成年綿羊(P<0.01),羔綿羊卵丘細(xì)胞IVM0h的CTSS、CTSB mRNA表達(dá)水平分別是成年綿羊的9倍和8倍；羔綿羊卵丘細(xì)胞IVM24h的CTSS、CTSB mRNA表達(dá)水平分別是成年綿羊的7倍和8倍。
　　 成熟液中添加E-64可下調(diào)卵丘細(xì)胞中CTSS、CTSB mRNA的表達(dá)水平,10μmol／L E-64

3、組IVM24h的卵丘細(xì)胞中CTSS、CTSB mRNA表達(dá)水平均較對(duì)照組顯著性降低(P<0.01)。在成熟液中添加1μmol／L、5μmol／L、10μmol／L E-64組和對(duì)照組的成年羊卵母細(xì)胞的體外成熟率分別為81.76％、80.54％、83.89％和82.78％,組間差異不顯著(P>0.05)；各組卵裂率分別為53.89％、56.58％、55.35％和53.74％,組間差異不顯著(P>0.05)；但5μmol／L和10μmol／

4、L E-64的囊胚發(fā)育率(26.82％、30.95％)顯著高于對(duì)照組和1μmol／L組(15.63％、18.23％)(P<0.05)。羔羊卵母細(xì)胞成熟液中添加10μmol／L E-64.的體外成熟率(52.63％)與對(duì)照組(51.67％)無顯著差異(P>0.05),但10μmol／L E-64組的卵裂率(14.5％)顯著高于對(duì)照組(11.2％)(P<0.05)。
　　 羔綿羊卵母細(xì)胞在體外成熟過程中各時(shí)期核相發(fā)展進(jìn)程均較成年綿羊