馬體細胞與牛卵母細胞和綿羊卵母細胞異質克隆胚的構建及其發(fā)育能力的比較.pdf

1、本試驗用不同的方法體外培養(yǎng)馬皮膚成纖維細胞，以其作為核供體構建了馬體細胞一綿羊卵母細胞和馬體細胞一牛卵母細胞兩種重組胚，并對其早期發(fā)育進行了研究。 馬皮膚成纖維細胞的分離培養(yǎng)：在37℃、5％CO<,2>、飽和濕度下，10％FBS的DMEM/F12培養(yǎng)液適宜于馬皮膚成纖維細胞體外培養(yǎng)，小組織塊直接培養(yǎng)法比酶消化法更易獲得馬皮膚成纖維細胞，經(jīng)4次消化傳代培養(yǎng)后，分離純化了馬皮膚成纖維細胞，并發(fā)現(xiàn)至少傳至第10代時有76.3％的染色體

2、還保持正常的二倍體倍性(2n=64)。 綿羊卵母細胞孤雌激活：綿羊卵母細胞在用離子霉素聯(lián)合6-DMAP的化學激活時，其卵裂率為81.68％，囊胚發(fā)育率為34.43％，優(yōu)于在激活電壓1300v/cm，脈沖時間為10μsec，脈沖次數(shù)為2次，間隔0.5s的條件下，卵裂率為74.22％，囊胚率為29.69％的電激活效果。 經(jīng)盲吸去核，帶下注射結合電融合構建重組胚。兩種重組胚在1580v/cm融合電壓下，融合率和卵裂率最高：馬-