版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、僅在致病性遲緩愛德華氏菌(Edwardsiella tarda)國外分離株中發(fā)現(xiàn)的毒力基因有7種,分別為orfA、citC、fimA、gadB、katB、mukF、esrB,其中orfA基因的序列未提交,故無法根據(jù)序列設(shè)計(jì)引物。本試驗(yàn)確定了另外6個(gè)毒力基因在國內(nèi)分離株中的分布情況,篩選出可用于檢測致病性遲緩愛德華氏菌的毒力基因,最終建立致病性遲緩愛德華氏菌的PCR檢測體系。根據(jù)這6個(gè)毒力基因序列,設(shè)計(jì)了6對引物,經(jīng)擴(kuò)增結(jié)果如下:citC
2、、fimA、gadB和mukF均出現(xiàn)與目的基因大小一致的條帶,經(jīng)測序驗(yàn)證為目的條帶;katB和esrB未擴(kuò)增出目的條帶。為了進(jìn)一步驗(yàn)證沒有擴(kuò)增出katB和esrB基因是否引物問題,引用相關(guān)文獻(xiàn)上katB和esrB基因引物和反應(yīng)體系條件再次擴(kuò)增,也未出現(xiàn)相應(yīng)條帶。試驗(yàn)結(jié)果顯示:在citC、fimA、gadB和mukF這4個(gè)毒力基因特異性試驗(yàn)中,其它常見致病菌沒有擴(kuò)增出與目的基因片段大小相近的條帶,引物特異性良好。各毒力基因單重PCR的靈敏
3、度結(jié)果:gadB基因可檢測到模板濃度為100fg/μL,其余3個(gè)毒力基因均可檢測到的模板濃度為10pg/μL;二重PCR靈敏度試驗(yàn)結(jié)果表明:與單重PCR的靈敏度一致,fimA/gadB靈敏度略優(yōu)于citC/mukF。毒力基因在國外分離株中和13株國內(nèi)分離株中的分布情況存在差異:gadB和mukF在已經(jīng)檢測的國內(nèi)分離株中均出現(xiàn),其余的出現(xiàn)情況分別為:fimA基因出現(xiàn)在其中的8株,citC基因出現(xiàn)在其中的7株。從引物靈敏度試驗(yàn)、特異性試驗(yàn)以
4、及毒力基因在國內(nèi)分離株的分布情況三方面綜合考慮,最終選用fimA/gadB二重。PCR體系作為致病性遲緩愛德華氏菌的檢測體系。遲緩愛德華氏菌檢測體系的建立對于包括鰻魚在內(nèi)的水產(chǎn)疾病的診斷、防治有著重要的實(shí)際意義。 mukF基因是遲緩愛德華氏菌重要的毒力基因,其功能為殺傷作用,由此克隆表達(dá)mukF毒力基因,并籍此制備抗原疫苗,有助于預(yù)防遲緩愛德華氏菌引起的水產(chǎn)養(yǎng)殖動物愛德華氏菌病。本試驗(yàn)根據(jù)已發(fā)表的遲緩愛德華氏菌mukF毒力基因序
5、列(AY0785lO),設(shè)計(jì)引物并擴(kuò)增出540bp大小的片段,定向克隆至克隆載體pblue,酶切鑒定后進(jìn)行序列測定和分析。結(jié)果表明:與國外參考株(AY078510)同源性達(dá)到87.8%,分析推導(dǎo)其核苷酸編碼的氨基酸序列顯示:氨基酸其同源性為93.3%,其編碼180個(gè)氨基酸,共有12個(gè)氨基酸發(fā)生變化,且基本均勻分布于序列中間。將其與pET30a(+)載體構(gòu)建重組質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)化了BL21工程菌株,經(jīng)SDS-PAGE分析表明:29KD附近出現(xiàn)一
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 致病性遲緩愛德華氏菌的鑒定、PCR檢測及esaC基因的功能鑒定.pdf
- 遲緩愛德華氏菌唾液酸酶的克隆表達(dá)與功能研究.pdf
- 多重PCR檢測禽致病性大腸桿菌毒力基因方法的建立及應(yīng)用.pdf
- 養(yǎng)殖大菱鲆病原菌遲緩愛德華氏菌的分離鑒定及快速檢測技術(shù)的建立.pdf
- 遲緩愛德華氏菌侵襲與粘附相關(guān)基因的功能研究.pdf
- 遲緩愛德華菌eha基因?qū)υ摼嚓P(guān)毒力的調(diào)控作用.pdf
- 嗜水氣單胞菌和遲鈍愛德華氏菌多重PCR檢測方法的建立與應(yīng)用.pdf
- 35838.遲緩愛德華氏菌鞭毛蛋白的研究
- 雞源致病性沙門氏菌毒力基因與致病性的相關(guān)性研究.pdf
- 牙鲆家系的建立與抗遲緩愛德華氏菌病家系的篩選與分析.pdf
- 致病性大腸桿菌、沙門氏菌毒力島雙重PCR方法建立與應(yīng)用.pdf
- 大菱鲆遲緩愛德華氏菌抗體檢測試紙條的研制及應(yīng)用.pdf
- 重要致病性弧菌TaqMan實(shí)時(shí)PCR檢測方法的建立.pdf
- 南方鲇愛德華氏菌的分離鑒定及雙重PCR診斷方法的建立.pdf
- 貂源肺炎克雷伯氏菌血清型和毒力基因的檢測及其致病性研究.pdf
- 黃鱔源遲緩愛德華氏菌的鑒定、分型及全基因組測序.pdf
- 上海地區(qū)致病性豬鏈球菌及其毒力基因的檢測.pdf
- 湖北省雞致病性大腸桿菌分離調(diào)查及毒力因子PCR檢測方法的建立.pdf
- NDiV致病性初步研究及實(shí)時(shí)熒光PCR檢測方法的建立.pdf
- 遲緩愛德華氏菌對血漿應(yīng)激的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf
評論
0/150
提交評論