豬生物發(fā)酵床墊料中細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)變化研究.pdf

1、規(guī)?；酿B(yǎng)殖推動(dòng)了我國(guó)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，但是隨之帶來(lái)的環(huán)境污染問(wèn)題也越來(lái)越引起人們的重視。發(fā)酵床養(yǎng)殖作為新型養(yǎng)殖技術(shù)，自從引入我國(guó)后，被大力地推廣和使用，為解決畜牧環(huán)境污染問(wèn)題帶來(lái)了新希望。發(fā)酵床養(yǎng)殖技術(shù)的核心是墊料中微生物群落的活動(dòng)，因此，近年來(lái)，生物發(fā)酵床微生物優(yōu)勢(shì)菌選育及微生物群落結(jié)構(gòu)多樣性變化規(guī)律成為研究的熱點(diǎn)。
　　 本研究采用傳統(tǒng)培養(yǎng)法和RFLP技術(shù)對(duì)豬生物發(fā)酵床墊料內(nèi)的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行研究，結(jié)果如下：

2、　　 1.微生物的分離鑒定試驗(yàn)
　　 (1)采用傳統(tǒng)培養(yǎng)法，從發(fā)酵床樣品中分離了30株細(xì)菌17株放線菌。
　　 (2)對(duì)分離的菌株進(jìn)行有機(jī)物(淀粉、蛋白質(zhì)、油脂、纖維素)降解試驗(yàn)，篩選出9株對(duì)有機(jī)物降解能力較強(qiáng)的菌株，其中細(xì)菌6株放線菌3株。
　　 (3)對(duì)6株高效細(xì)菌進(jìn)行生理生化鑒定和16SrRNA鑒定，結(jié)果為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillus stearo

3、thermophilus)、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)、蠟樣芽胞桿菌(Bacillus cereus)、粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratiamarcescens)和假單胞桿菌(Pseudomonas)；對(duì)3株高效放線菌進(jìn)行了生理生化鑒定，初步判斷結(jié)果為鏈霉菌屬(Streptomyces)、螺孢菌屬(Spirillospora)、孢囊菌屬(Dactylosporangium)。
　　 2.RFLP技術(shù)分

4、析
　　 (1)基因組DNA的提取試驗(yàn)：參照武亮(2010a)提供的蝸牛酶和蛋白酶雙重酶細(xì)胞裂解法分別對(duì)保育1年期(B1)、保育2年期(B2)、保育3年期(B3)、育成1年期(Y1)、育成2年期(Y2)、育成3年期(Y3)等豬生物發(fā)酵床6個(gè)樣品進(jìn)行了微生物總基因組DNA的提取。瓊脂糖凝膠電泳片段大小約為21kp；測(cè)得DNA/RNA之比在1.6～1.8之間，DNA濃度在300ng/ul～400ng/ul之間。因此，用本方法提取豬生

5、物發(fā)酵床樣品的微生物總基因組DNA質(zhì)量較高，可以進(jìn)行后續(xù)的分子生物學(xué)研究。
　　 (2)通過(guò)酶切分型分析，從保育1年、2年、3年期樣品中，分別獲得28、20和15個(gè)序列類(lèi)型；從育成1年、2年、3年樣品中分別獲得30、23和17個(gè)序列類(lèi)型。
　　 (3)隨著使用年限增加，豬生物發(fā)酵床墊料中的微生物群落的多樣性有降低的趨勢(shì)。
　　 (4)生物發(fā)酵床樣品中，所獲得的序列歸到厚壁菌門(mén)、變形菌門(mén)和擬桿菌門(mén)中，分別占克隆子總