雞傳染性貧血病毒LAMP診斷方法的建立與檢測(cè).pdf

1、雞傳染性貧血病(chicken infectious anemia，CIA)是由雞傳染性貧血病毒(chicken anemiavirus，CAV)引起的一種危害雛雞的免疫抑制性疾病。1日齡雛雞最易感，雛雞感染的死亡率為10-20％。此外，該病的感染能致使雞群免疫抑制，降低疫苗的使用效率，繼發(fā)其它疾病，雞只生產(chǎn)性能下降，造成更為嚴(yán)重的間接損失。
　　 由于該病在雞群中具有一定的隱蔽性，使得該病在大部分雞群長(zhǎng)時(shí)間地普遍存在。血清調(diào)查

2、顯示幾乎所有雞群均不同程度地存在該病的感染，增大了對(duì)該病的防制難度。因而從病原學(xué)的角度對(duì)該病進(jìn)行檢測(cè)是很有必要的。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)技術(shù)自被發(fā)明以來(lái)，由于其反應(yīng)條件簡(jiǎn)易，反應(yīng)結(jié)果可視，受到廣泛的關(guān)注，并越來(lái)越多地應(yīng)用于各行業(yè)的檢測(cè)。
　　 本試驗(yàn)嘗試建立雞傳染性貧血病毒的LAMP檢測(cè)方法，并期望開(kāi)發(fā)出可應(yīng)用于臨床的檢測(cè)試劑。通過(guò)對(duì)雞傳染性貧血病毒基因組的比對(duì)，并結(jié)合病毒基因組的特點(diǎn)，選取保守的VP2基因作為雞傳染性貧血病毒LAM

3、P引物的設(shè)計(jì)區(qū)域。利用在線軟件進(jìn)行LAMP引物的設(shè)計(jì)，從大量引物中進(jìn)行篩選，利用實(shí)時(shí)濁度儀對(duì)篩選引物進(jìn)行驗(yàn)證淘汰，挑選出較好的幾套引物。進(jìn)一步評(píng)估其特異性與靈敏度。直至選出最佳引物組。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該引物不與其它常見(jiàn)的病毒性禽傳染病發(fā)生非特異反應(yīng)；反應(yīng)1h與普通PCR反應(yīng)30個(gè)循環(huán)相當(dāng)或更為靈敏。初次對(duì)22份臨床樣本的檢測(cè)符合率為100%。以最佳引物組配制質(zhì)量可控的兩批制品。
　　 第一批制品對(duì)人工感染的動(dòng)物試驗(yàn)樣

4、品檢測(cè)符合率為85.1%；第一批制品對(duì)臨床樣本的檢測(cè)符合率為83.6%。第一批制品對(duì)24株雞傳染性貧血病毒的敏感性檢測(cè)率為100%，并且具有良好的批內(nèi)批間重復(fù)性。第一批制品保存超過(guò)一年后的檢測(cè)靈敏度仍可達(dá)到103拷貝的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品。
　　 第二批制品對(duì)人工感染的動(dòng)物試驗(yàn)樣品檢測(cè)符合率為93.5%；第二批制品對(duì)臨床樣本的檢測(cè)符合率為83.7%。進(jìn)一步的試驗(yàn)仍在繼續(xù)進(jìn)行中。本試驗(yàn)成功建立了雞傳染性貧血病毒的LAMP檢測(cè)方法，該方法特異