赤霉素調(diào)控蘋(píng)果節(jié)間伸長(zhǎng)的生理及分子生物學(xué)機(jī)制研究.pdf

1、以國(guó)光×特拉蒙雜交后代柱型和普通型蘋(píng)果(MalusdomesticaBorkh)組培苗為試材，分別進(jìn)行不同濃度和不同天數(shù)的外源GA3處理，測(cè)定不同濃度GA3處理后組培苗的酶活性、內(nèi)源激素含量的動(dòng)態(tài)變化。以柱型和普通型蘋(píng)果莖尖為試材，克隆得到蘋(píng)果的內(nèi)根-貝殼杉烯合成酶(Ent-kaurenesynthase，KS)基因和古巴焦磷酸合酶(Copalylpyrophosphatesynthase，CPS)基因，并對(duì)這兩個(gè)基因進(jìn)行組織表達(dá)和生物

2、信息學(xué)分析，以期探討蘋(píng)果赤霉素合成途徑上游的調(diào)控機(jī)制。獲得的研究結(jié)果如下:
　　 1.外施GA3明顯促進(jìn)蘋(píng)果組培苗新梢的生長(zhǎng)，柱型蘋(píng)果對(duì)GA3的反應(yīng)較普通型蘋(píng)果不敏感。外施GA3能明顯提高柱型蘋(píng)果α-淀粉酶活性，普通型蘋(píng)果反應(yīng)相對(duì)不明顯;高濃度的GA3對(duì)SOD酶活性有抑制作用，隨處理天數(shù)先抑制后促進(jìn)，不同的是，與對(duì)照組相比，GA3處理抑制柱型蘋(píng)果SOD酶活性促進(jìn)普通型蘋(píng)果SOD酶活性;外施GA3后柱型蘋(píng)果的POD酶活性高于普通型

3、蘋(píng)果，隨處理天數(shù)大致表現(xiàn)上升趨勢(shì)。
　　 2.內(nèi)源激素的測(cè)定結(jié)果表明，柱型蘋(píng)果組培苗IAA含量低于普通型植株，外施低濃度GA3顯著提高了柱型蘋(píng)果IAA含量，高濃度則抑制;而外施GA3降低了普通型蘋(píng)果IAA含量，隨處理天數(shù)大致呈上升趨勢(shì);柱型蘋(píng)果組培苗ZR含量高于普通型植株;外施GA3略微降低了柱型蘋(píng)果ZR的含量，高濃度的GA3抑制作用更為顯著，普通型蘋(píng)果ZR含量前16d變化不明顯;柱型蘋(píng)果ABA含量高于普通型，外施GA3前8d柱

4、型和普通型蘋(píng)果ABA含量均顯著降低，之后上升;柱型蘋(píng)果GA3含量略低于普通型植株，外施GA3提高了兩種株型的內(nèi)源GA3含量，且隨處理天數(shù)大致呈上升趨勢(shì);柱型和普通型蘋(píng)果GA4含量差別不明顯，外施GA3后兩種株型GA4含量均顯著上升，且上升程度均大致與外施GA3的濃度呈正相關(guān)。
　　 3.以蘋(píng)果莖尖為試材，同源克隆得到KS的cDNA全長(zhǎng)序列，命名為MdKS，開(kāi)放閱讀框（ORF）全長(zhǎng)2214bp，編碼737個(gè)氨基酸，推斷相對(duì)分子量為

5、83.7244kDa，等電點(diǎn)為5.47;氨基酸同源性及聚類(lèi)分析表明，MdKS與已報(bào)道的其它11種植物的KS氨基酸序列具有52％-98％的相似性，該基因最先和梨聚類(lèi)，其次是板栗;MdKS屬于萜類(lèi)合成酶亞家族，具有DDXXD結(jié)構(gòu)域。
　　 4.從柱型蘋(píng)果中克隆得到CPS基因2187bp的cDNA片段，氨基酸序列同源性及聚類(lèi)分析表明，MdCPS與板栗屬于同一進(jìn)化支，同源性達(dá)69％,與毛果楊屬于同一分支，同源性為68％;MdCPS也屬于