MDR-TB菌株的耐藥表型和分子特征分析.pdf

1、MDRTB菌株的耐藥表型和分子特征分析Thecharacteristicsofphenotypeandgenotypeofmultidrugresistanttuberculosisisolates碩士研究生：范齊文學(xué)號(hào)：09211300003導(dǎo)師：吳文娟教授導(dǎo)師小組成員：高謙教授范小勇副研究員公共衛(wèi)生臨床中心二0—二年五月復(fù)□大學(xué)碩十畢業(yè)論文中文摘要中文摘要結(jié)核病己經(jīng)成為全球嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題，全球估計(jì)13人口感染了結(jié)核分枝桿菌(My

2、cobacteriumtuberculosisMTB)。據(jù)WHO最新公布統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，2010年全世界有880萬(wàn)新發(fā)結(jié)核病，大約145萬(wàn)人死于結(jié)核病。近年來(lái)結(jié)核病的耐藥情況亦愈加嚴(yán)重，耐多藥結(jié)核（multidrugresistanttuberculosisMDRTB)及廣泛耐藥結(jié)核(extensivelydrugresistanttuberculosisXDRTB)患者數(shù)量逐年增加，給結(jié)核病的控制帶來(lái)了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。本研究通過(guò)對(duì)上海市公共衛(wèi)生

3、臨床中心和南京市胸科醫(yī)院臨床分離MDR及XDRTB菌株的耐藥表型進(jìn)行分析，了解兩家醫(yī)院結(jié)核耐藥的現(xiàn)狀和趨勢(shì)；通過(guò)分子線性探針雜交方法分析MDRTB菌株的基因型耐藥特點(diǎn)，明確其耐藥基因突變譜；運(yùn)用分子流行病學(xué)方法對(duì)分子線性探針雜交初篩出的復(fù)合感染菌株進(jìn)行基因分型，確認(rèn)耐藥結(jié)核病中復(fù)合感染的存在。(1)M(jìn)DRTB菌株耐藥表型特征分析本研究收集上海市公共衛(wèi)生臨床中心和南京市胸科醫(yī)院分離并經(jīng)初篩鑒定為MDRTB的菌株，利用MGIT960儀器法

4、檢測(cè)菌株對(duì)異煙肼（isoniazidINH)、利福平(rifampinRFP)、乙胺丁醇(ethambutol，EMB)、氧氟沙星(ofloxacinOFX)、莫西沙里(moxifloxacinMFX)及阿米卡星(amikacin，AMK)等藥物的敏感性；用MGIT960法、Wayne法及自行建立的微孔板法檢測(cè)所選菌株對(duì)B比嗪酷胺(pyrazinamidePZA)的敏感性。結(jié)果顯示：①94株MDRTB菌株中，34株對(duì)EMB耐藥，16株對(duì)

5、AMK耐藥，51株對(duì)OFX藥，52株對(duì)MFX耐藥，耐藥率分別為36.2%，17.0%54.3%和55.3%。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)13株為XDRTB菌株。②從94株MTB中隨機(jī)挑選53株用MGIT960及Wayne法檢測(cè)其對(duì)PZA的敏感性，經(jīng)MGIT960檢測(cè)，27株對(duì)PZA敏感，26株對(duì)PZA耐藥經(jīng)Wayne試驗(yàn)檢測(cè)，27株為PZase陽(yáng)性，26株為PZase陰性。③53株P(guān)ZA敏感性檢測(cè)的結(jié)核分枝桿菌，經(jīng)微孔板法檢測(cè)，12株在規(guī)定時(shí)間內(nèi)未生長(zhǎng)，

6、重復(fù)試驗(yàn)后結(jié)果相同。41株在514天內(nèi)獲得結(jié)果。將耐藥臨界濃度定為100pgml，微孔板法結(jié)果與MGIT960結(jié)果一致率達(dá)97.6%。以上結(jié)果表明MDRTB對(duì)喹諾酮類藥物及PZA的耐藥率較高，而對(duì)AMK的耐藥率相對(duì)較低；PZA微孔板法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌對(duì)PZA敏感性的結(jié)果準(zhǔn)確可靠，有望成為實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法推廣使用。(2)M(jìn)DRTB菌株耐藥基因型特征分析為了解MDRTB#丨株耐藥基因型特點(diǎn)，本研究利用分子線性探針雜交技術(shù)對(duì)94株MDRTB菌