致病性豬鏈球菌安徽分離株的生物學特性研究.pdf

1、豬鏈球菌病是鏈球菌屬中豬鏈球菌(Streptococcus suis，S.suis)、馬鏈球菌獸疫亞種、馬鏈球菌類馬亞種以及Lancefield分群中D、E、L群鏈球菌引致豬的疫病的總稱，臨床上主要表現(xiàn)為淋巴結膿腫、腦膜炎、關節(jié)炎、心內膜炎以及敗血癥等癥狀。S.suis是世界范圍內引致豬鏈球菌病最主要的病原。S.suis的生物學特性具有地域性差異。根據莢膜多糖可將S.suis分為35個血清型，即1型～34型和1/2型。其中1型、2型、7

2、型和9型對豬的致病性較強，豬2型鏈球菌(Streptococcus suis serotype2，S.suis2)在世界范圍內流行最廣。本研究針對安徽地區(qū)49株致病性豬鏈球菌的血清型和毒力基因型分布、致病性、耐藥性等相關生物學特性進行檢測分析。
　　 通過觀察菌落生長特征、革蘭氏染色鏡檢，初步研究安徽地區(qū)S.suis的形態(tài)及培養(yǎng)特性和溶血性。49株S.suis中46株菌形態(tài)、染色、培養(yǎng)特征符合S.suis的特點，3株菌在血平板上

3、呈現(xiàn)出與其他菌株不同的形態(tài)特征；49株S.suis在兔血平板上21株呈現(xiàn)α溶血，20株呈不典型β溶血，7株β溶血，1株呈γ溶血。采用microELISA法對19株S.suis2的溶血價測定，結果顯示α溶血、不典型β溶血和β溶血的菌株溶血價分別在在1:8～1:32，1:4～1:32，1:64～1:128之間。表明不同S.suis在兔血平板上的溶血類型可能不同，β溶血的S.suis2菌株的溶血價明顯高于α溶血、不典型β溶血。
　　

4、利用PCR分型方法對49株豬鏈球菌進行主要流行血清型1、2、7、9型分型鑒定。其中豬2型鏈球菌19株，豬1型鏈球菌8株，豬7型鏈球菌7株，分別占38.8％，16.3％，14.3％，沒有檢測出豬9型鏈球菌。表明安徽省S.suis感染存在多種血清型，其中S.suis2為優(yōu)勢血清型。根據文獻合成mrp、epf、sly三種毒力因子基因的引物，通過PCR檢測表明，49株豬鏈球菌中36.7％為mrp+，38.8％為epf+，71.4％為sly+。P

5、CR擴增S.suis2毒力基因cps2J、mrp、epf和sly，對這4種毒力基因的擴增片段進行序列測定，并與國內外其他分離株的基因序列進行比較。分析發(fā)現(xiàn)，57.9(11/19)S.suis2菌株的毒力基因型為cps2J+/mrp+/epf+/sly+，為優(yōu)勢基因型；S.suis2安徽分離株cps2J、mrp、epf和sly基因部分序列之間及其與國內外其他地區(qū)S.suis2分離株間的同源性分別在98.3％以上、99.2％以上、87.8％

6、以上和99.0％以上。表明安徽省豬群中流行的S.suis2毒力基因的分布特征與國內外報道的相似，CPS、MRP、EPF和SLY是安徽省流行的S.suis2的重要毒力因子。
　　 采用Kirby-Bauer紙片瓊脂擴散法檢測49株S.suis對25種臨床常用藥物的敏感性。安徽地區(qū)豬鏈球菌分離株普遍對阿莫西林、氨芐西林、利福平和先鋒霉素V等敏感，敏感率分別為95.92％、93.88％、85.71％、81.63％；對桿菌肽和四環(huán)素的耐

7、藥率較高，分別達到87.76％、85.71％。所有菌株均有多重耐藥性，耐3～9種抗生素的占36.7％，耐10～19種抗生素的占53.0％，耐20～24種抗生素的占8.1％，耐25種抗生素的占2.0％，多重耐藥譜為桿菌肽-四環(huán)素-強力霉素-磺胺甲噁唑。表明安徽省臨床分離的致病性豬鏈球菌的耐藥程度非常嚴重。
　　 按寇氏法測定5株S.suis2菌株的半數(shù)致死量(LD50)。發(fā)現(xiàn)具有β溶血，較高溶血價(1:64)及毒力基因型為mrp+