EDSV京911株五鄰體優(yōu)勢(shì)抗原表位的篩選及鑒定.pdf

1、減蛋綜合征(Egg Drop Syndrome，EDS-76)，又名鴨腺病毒Ⅰ型(DAVⅠ)。該病是由減蛋綜合征病毒(EDSV)引起的一種以產(chǎn)蛋雞產(chǎn)畸形蛋、薄殼或無(wú)殼蛋，產(chǎn)蛋率嚴(yán)重下降為主要特征的傳染病。1976年首先在荷蘭發(fā)生，以后在西歐國(guó)家相繼發(fā)生報(bào)道，乃至在世界范圍內(nèi)許多國(guó)家都有發(fā)生，給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。五鄰體蛋白(Penton)是減蛋綜合征病毒主要的結(jié)構(gòu)蛋白之一，五鄰體蛋白具有良好的免疫原性和抗原性，并且含有中和抗原表

2、位，其與細(xì)胞表面的整聯(lián)蛋白作用，有助于腺病毒對(duì)宿主細(xì)胞的吸附結(jié)合、侵入和內(nèi)化。
　　 本研究將攜帶五鄰體基因的重組質(zhì)粒pET-30a-Penton作為PCR擴(kuò)增模板，利用基因片段重疊表達(dá)技術(shù)對(duì)EDSV五鄰體蛋白的抗原表位進(jìn)行篩選，為EDSV主要抗原結(jié)構(gòu)的深入研究、亞單位疫苗及診斷試劑的研制提供物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 本研究為了鑒定EDSV五鄰體蛋白的優(yōu)勢(shì)抗原表位，制備了鴨抗EDSV陽(yáng)性血清和鵝抗EDSV血清，可用作血清學(xué)診斷試

3、劑，并設(shè)計(jì)了6個(gè)覆蓋五鄰體結(jié)構(gòu)蛋白的多肽片段，短肽長(zhǎng)為84-97aa，相互重疊14-24aa，進(jìn)行融合表達(dá)，利用Ni-NTA對(duì)蛋白進(jìn)行純化，經(jīng)Westernblot分析表明PA(1-87aa)能夠被鴨抗EDSV陽(yáng)性血清所識(shí)別。根據(jù)以上試驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)一步設(shè)計(jì)了4個(gè)覆蓋PA(1-87aa)的多肽片段，這些短肽長(zhǎng)為29-33aa，相互重疊12-13aa，進(jìn)行了第二輪的抗原表位篩選，結(jié)果顯示PA-1(1-33aa)、PA-2(21-49aa)、P

4、A-3(37-68aa)具有抗原性，將3個(gè)抗原優(yōu)勢(shì)區(qū)合并為一段進(jìn)行了第三輪篩選，結(jié)果顯示PA-H-1(1-17aa)、PA-H-4(22-39aa)、PA-H-5(30-47aa)、PA-H-6(38-53aa)、PA-H-8(51-68aa)具有抗原性，其中PA-H-1和PA-H-8抗原性最強(qiáng)，取這兩個(gè)抗原性最強(qiáng)的短肽進(jìn)行了第四輪篩選，設(shè)計(jì)了6個(gè)覆蓋PA-H-1和PA-H-8的短肽片段，各合成一對(duì)寡聚核酸片段，進(jìn)行融合表達(dá)及純化，經(jīng)W