鴨腸炎病毒ul27基因特征及其編碼蛋白部分抗原表位優(yōu)勢(shì)區(qū)的鑒定.pdf

1、鴨病毒腸炎(DVE)又名鴨瘟(DP)，是由鴨腸炎病毒(DEV)引起的鴨、鵝及多種雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病。其特征是流行廣泛，傳播迅速，發(fā)病率和死亡率高，給養(yǎng)鴨業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。DEV具有皰疹病毒典型的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，因此劃分為皰疹病毒科，其亞科、屬、種分類地位尚未確定。大多數(shù)皰疹病毒有12種糖蛋白，gB是最保守的結(jié)構(gòu)糖蛋白之一，在多數(shù)皰疹病毒中g(shù)B同源物由ul27基因編碼。該糖蛋白是病毒復(fù)制所必須的，參與病毒吸附、融合穿

2、入及病毒在細(xì)胞間的傳播，能刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，介導(dǎo)細(xì)胞免疫，是重組疫苗和亞單位疫苗的候選抗原，也是哺乳動(dòng)物皰疹病毒血清學(xué)診斷方法的候選抗原。目前還沒(méi)有關(guān)于DEVul27基因及其編碼產(chǎn)物的深入研究。 本試驗(yàn)以DEVul27基因?yàn)檠芯繉?duì)象，采用PCR技術(shù)克隆了DEVC-KCE株ul27基因，并從該基因與其他皰疹病毒的同源性、編碼蛋白的結(jié)構(gòu)及抗原性等方面進(jìn)行了較為詳盡的生物信息學(xué)分析，在此基礎(chǔ)上利用原核表達(dá)載體pET-32a在Ros

3、etta(DE3)PlysS宿主菌中分別表達(dá)了該基因9個(gè)抗原片段，以鴨腸炎病毒高免血清為第一抗體，通過(guò)Westernblot確定了UL27蛋白的B細(xì)胞線性抗原表位優(yōu)勢(shì)區(qū)，以制備的鼠源抗原肽特異性抗血清進(jìn)行蝕斑減數(shù)試驗(yàn)確定了中和抗原表位的優(yōu)勢(shì)區(qū)，利用體外淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)揭示了外周血抗原特異性T淋巴細(xì)胞對(duì)DEV的回憶應(yīng)答規(guī)律，通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析初步確定了T淋巴細(xì)胞的抗原表位。結(jié)果表明：DEVC-KCE株ul27基因完整ORF為3003bp，編碼1

4、000個(gè)氨基酸，同源性分析表明該基因?yàn)棣涟捳畈《緂B同源物，其遺傳進(jìn)化分析提示DEV與α皰疹病毒馬立克氏病毒屬親緣關(guān)系最近：ul27基因編碼產(chǎn)物具有典型跨膜蛋白結(jié)構(gòu)，推測(cè)其信號(hào)肽序列位于N端前105個(gè)氨基酸以內(nèi)，胞外區(qū)從信號(hào)肽裂解位點(diǎn)至832位氨基酸，跨膜區(qū)為833～883位氨基酸，胞內(nèi)區(qū)為884～1000位氨基酸；蛋白胞外區(qū)存在8個(gè)潛在的N糖基化位點(diǎn)，10個(gè)保守的半胱氨酸，具有潛在的翻譯修飾后的酶解位點(diǎn)，HSPGs結(jié)合位點(diǎn)、PACS-

5、1結(jié)合基序，符合α皰疹病毒gB的結(jié)構(gòu)特征和功能特征；Westernblot結(jié)果表明UL27-2、UL27-5、UL27-7、UL27-9抗原肽存在B細(xì)胞線性表位，其中UL27-5抗原性最強(qiáng)，UL27-7刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)；蝕斑減數(shù)試驗(yàn)確定UL27-5、UL27-6、UL27-7、UL7-8、UL27-9、UL27-10抗原肽的抗血清具有中和活性，其中UL27-7、UL27-8是中和表位優(yōu)勢(shì)區(qū)；體外淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)表明，9段抗