本氏煙中ALY916、Gβ互作蛋白的篩選及其功能的研究.pdf

1、植物病原菌產(chǎn)生的激發(fā)子和病程相關(guān)分子模式(pathogen-associatedmolecularpatterns，PAMP)是一類重要的信號(hào)分子，模仿非親和互作中植物與病原菌的信號(hào)交流，啟動(dòng)不同的級(jí)聯(lián)信號(hào)途徑，誘發(fā)植物的抗病性，導(dǎo)致過敏性細(xì)胞死亡(hypersensitivecelldeath，HCD)和氣孔關(guān)閉。NbALY916一個(gè)調(diào)控過敏性細(xì)胞死亡的基因，研究發(fā)現(xiàn)該基因沉默能抑制Nep1誘導(dǎo)的HR，減緩harpin誘導(dǎo)的HR，且參

2、與MAPKKKα和WRKY2的調(diào)控;異三聚體G蛋白連接著細(xì)胞表面的受體和下游的效應(yīng)因子，其中Gβ亞基沉默抑制細(xì)菌蛋白激發(fā)子harpin誘導(dǎo)的過敏反應(yīng)，Gβ亞基包括Gβ1和Gβ2，研究發(fā)現(xiàn)它們參與的細(xì)胞防衛(wèi)反應(yīng)調(diào)節(jié)途徑有所差異。通過對(duì)ALY916及Gβ亞基的互作蛋白的篩選，找尋到下游或者上游的調(diào)控基因，對(duì)完善激發(fā)子誘導(dǎo)的防衛(wèi)反應(yīng)信號(hào)通路途徑提供重要依據(jù)，可以為有效的病害防控策略提供新的研究思路。
　　本文利用酵母雙雜交技術(shù)，以ALY

3、916為誘餌蛋白，在煙草cDNA文庫(kù)中進(jìn)行靶標(biāo)篩選，得到一些涉及植物抗逆機(jī)制和重要新陳代謝的基因?？寺b1-2編碼蛋白屬于糖原合成酶激酶(GSK)家族蛋白;克隆Nb2-13編碼一種過氧化物酶體膜相關(guān)蛋白;克隆Nb4-2編碼一種醛脫氫酶;克隆Nb7-33編碼一類GTP結(jié)合蛋白;克隆Nb25-8編碼核酮糖二磷酸羧化酶的激活酶前體;克隆Nb12-33編碼一個(gè)RNA解旋酶;克隆Nb16-3編碼一個(gè)磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)，還有

4、九個(gè)克隆比對(duì)到的基因功能并未有人進(jìn)行研究，有待我們探索。
　　分別以G蛋白Gβ1和Gβ2為誘餌蛋白，在煙草cDNA文庫(kù)篩選其互作蛋白，得到Gβ1和Gβ2的互作蛋白后，選取轉(zhuǎn)化得到重復(fù)率較高的基因?yàn)閷?duì)象，構(gòu)建PVX病毒表達(dá)載體，采用病毒誘導(dǎo)基因沉默(virusinducinggenesilencing，VIGS)技術(shù)篩選能調(diào)控受激發(fā)子(Nep1、harpin和INF1)誘導(dǎo)的過敏性細(xì)胞死亡的基因，篩選到能與Gβ1和Gβ2都互作的二磷