月季‘月月粉’丁香酚合成酶基因(RcEGS)功能初步驗(yàn)證.pdf

1、隨著生活質(zhì)量的不斷提高，人們對(duì)觀賞植物品質(zhì)的要求也越來(lái)越高，不僅僅要有豐富的花色，還希望有怡人的香味。傳統(tǒng)的育種技術(shù)在花香改善方面作用非常有限，為了能突破這一瓶頸，進(jìn)一步提高花卉品質(zhì)，大量花香基因被研究人員克隆出來(lái)，其相應(yīng)的遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立就顯得尤為重要。
　　課題組前期已成功從月季‘月月粉’中克隆得到丁香酚合成酶(RcEGS)基因，本試驗(yàn)通過(guò)以月季‘月月粉’胚性愈傷和矮牽牛(Petuniahybrida)葉盤為受體，對(duì)丁香酚合

2、成酶基因進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，進(jìn)而進(jìn)行目的基因RcEGS轉(zhuǎn)化的鑒定和表達(dá)分析，初步驗(yàn)證此基因的功能，研究結(jié)果如下:
　　(1)月季‘月月粉’腋芽在低濃度6-BA1mg/L下萌發(fā)效果更好，萌發(fā)的叢生苗在1/2MS+NAA0.05mg/L生根培養(yǎng)基上的生根效果佳，葉片量多、自然舒展，‘月月粉’叢生苗在增殖培養(yǎng)基上能大量增殖，但葉片卷縮，不利于后期利用;
　　(2)愈傷的誘導(dǎo)多發(fā)生在葉柄處，不同梯度濃度的2，4-D對(duì)‘月月粉’愈傷誘導(dǎo)的試

3、驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)2，4-D3mg/L、碳源為葡萄糖時(shí)，‘月月粉’的愈傷誘導(dǎo)率最高，達(dá)到90.33％，愈傷狀態(tài)最佳，添加AgNO310mg/L能進(jìn)一步提高‘月月粉’的愈傷誘導(dǎo)率，達(dá)到95.00％;
　　(3)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TDZ濃度≦5mg/L無(wú)法通過(guò)愈傷途徑獲得月季‘月月粉’不定芽，月季‘月月粉’愈傷在原愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上可以產(chǎn)生不定芽，但再生率只有0.21％;
　　(4)含有GUS基因的農(nóng)桿菌（OD600值=0.5）侵染‘月月粉’愈傷1

4、0min，GUS染色發(fā)現(xiàn)‘月月粉’愈傷瞬時(shí)表達(dá)率達(dá)到93.3％;
　　(5)用帶有RcEGS基因的農(nóng)桿菌EHA105（OD600值=0.5）侵染月季‘月月粉’胚性愈傷15min，三個(gè)月連續(xù)培養(yǎng)成功獲得月季‘月月粉’小苗;
　　(6)矮牽牛含有丁香酚(EGS)合成的底物松柏酯，常被作為花香研究的模式植物。利用“葉盤法”獲得轉(zhuǎn)基因矮牽牛小芽，通過(guò)抗生素篩選和分子水平篩選獲得陽(yáng)性植株，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)矮牽牛轉(zhuǎn)化成功率是55％;