青蒿多糖藥理作用的研究.pdf

1、青蒿多糖(Polysaccharides from Artemisia annua L.)是菊科蒿屬植物青蒿的主要活性成分之一。目前,國(guó)內(nèi)外對(duì)青蒿多糖的研究相對(duì)較少,本論文分離提取出青蒿多糖,從體內(nèi)試驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)入手,研究青蒿多糖的藥理作用,為青蒿多糖的臨床應(yīng)用及開(kāi)發(fā)新用途提供理論依據(jù)。具體研究方法和結(jié)果如下:
　　(1)采用木瓜蛋白酶-水提醇沉法提取并精制青蒿多糖,蒽酮硫酸法測(cè)定還原糖含量,進(jìn)行紅外光譜分析等多糖理化性質(zhì)分析;(

2、2)用環(huán)磷酰胺(CTX)建立小鼠免疫抑制模型,分別以4種不同劑量(25 mg/kg、50mg/kg、100 mg/kg、150 mg/kg)的青蒿多糖進(jìn)行腹腔注射給藥,檢測(cè)白細(xì)胞數(shù)量和血清中溶菌酶的水平,計(jì)算胸腺、脾臟指數(shù)并觀察其組織形態(tài)學(xué)變化。選用正常小鼠,分別以5種不同劑量(25 mg/kg、50mg/kg、100 mg/kg、150 mg/kg、300 mg/kg)的青蒿多糖進(jìn)行腹腔注射給藥,測(cè)定胸腺、脾臟指數(shù),檢測(cè)血清中IL-1

3、β、IL-2、IL-6、IFN-γ水平及溶菌酶的水平;(3)進(jìn)行了青蒿多糖的急性毒性實(shí)驗(yàn),改良寇氏法計(jì)算青蒿多糖的半數(shù)致死量(LD50);(4)用二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓急性炎癥,分別用3種不同劑量(25 mg/kg、50mg/kg、100 mg/kg)的青蒿多糖腹腔注射給藥,測(cè)定小鼠耳腫脹率和腫脹抑制率。(5)用豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)體外誘導(dǎo) RAW264.7細(xì)胞和豬脾細(xì)胞,測(cè)定NO、ROS、GSH、GSSG和MDA的水平及T-SOD活

4、性,篩選建立氧化應(yīng)激模型的最適PCV2濃度。用PCV2建立RAW264.7細(xì)胞和豬脾細(xì)胞氧化應(yīng)激模型,用不同濃度(25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)的青蒿多糖處理,測(cè)定NO、ROS、GSH、GSSG和MDA的水平及T-SOD活性。
　　結(jié)果表明:(1)青蒿多糖中還原糖含量為24.74％,不含淀粉與氨基酸,紅外光譜分析顯示青蒿多糖糖鏈結(jié)構(gòu)為吡喃型并有乙?；鶊F(tuán)存在。(2)4個(gè)濃度的青蒿多糖均能顯著對(duì)抗

5、 CTX引起的脾臟萎縮和溶菌酶水平降低(P<0.05);增大脾小結(jié)和升高淋巴細(xì)胞數(shù)量,增加胸腺內(nèi)的淋巴細(xì)胞數(shù)量。25 mg/kg的青蒿多糖能顯著提高正常小鼠的IL-6水平,50 mg/kg的青蒿多糖能顯著提高正常小鼠的IL-1β和IFN-γ水平,100 mg/kg的青蒿多糖能顯著提高正常小鼠的IL-2水平;25 mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg的青蒿多糖能顯著提高正常小鼠的溶菌酶水平(P<0.05);(3)

6、青蒿多糖的LD50值為301.51mg/kg;其95%可信限范圍為270.80~332.21 mg/kg。(4)50 mg/kg、100 mg/kg的青蒿多糖能顯著降低二甲苯所致的小鼠耳腫脹率(P<0.05);與地塞米松相比,100 mg/kg的青蒿多糖能顯著提高小鼠耳腫脹抑制率(P<0.05)。(5)濃度為10-2的PCV2適合建立RAW264.7細(xì)胞氧化應(yīng)激模型,濃度為10-1的PCV2適合建立豬脾細(xì)胞氧化應(yīng)激模型。PCV2體外誘導(dǎo)

7、 RAW264.7細(xì)胞,各個(gè)濃度的青蒿多糖均能顯著降低 ROS的水平,50μg/mL和200μg/mL的青蒿多糖能顯著降低GSSG含量,25μg/mL、50μg/mL、200μg/mL青蒿多糖能夠顯著下調(diào)MDA水平,200μg/mL青蒿多糖能顯著上調(diào)T-SOD的活性(P<0.05)。50μg/mL、100μg/mL的青蒿多糖能顯著降低PCV2體外感染的豬脾細(xì)胞分泌NO水平,各個(gè)濃度的青蒿多糖均能顯著降低PCV2體外感染的豬脾細(xì)胞分泌RO