黑線倉鼠CRH及其受體的差異表達(dá)以及與雄性同性攻擊行為的關(guān)系.pdf

1、嚙齒動物特別是鼠類密度過高時,會對人類的生產(chǎn)和生活造成極大危害,我國每年因鼠害造成的經(jīng)濟(jì)損失令人觸目驚心。黑線倉鼠(Cricetulus barabensis)作為我國華北地區(qū)農(nóng)業(yè)害鼠的優(yōu)勢種之一,其繁殖力極強(qiáng),種群數(shù)量大,并有儲食習(xí)性,常對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成很大危害,并參與一些流行病的傳播,故應(yīng)予以加強(qiáng)防控。深入研究黑線倉鼠種群的暴發(fā)機(jī)理、種群動態(tài)特征以及高繁殖機(jī)制,對于制定合理高效的農(nóng)業(yè)害鼠綜合治理措施具有十分重要的意義。
　　促腎

2、上腺皮質(zhì)激素釋放激素(Corticotropin Releasing Hormone,CRH)是一種下丘腦促垂體激素,不僅具有調(diào)節(jié)垂體-腎上腺軸活動、控制機(jī)體應(yīng)激(如攻擊行為)等功能,而且近年來的研究證實(shí) CRH尚參與生殖功能的調(diào)控。CRH通過與其兩種主要的受體(Corticotropin Releasing Hormone Recepter1,CRHR1;Corticotropin Releasing Hormone Recepter

3、2,CRHR2)結(jié)合,影響、調(diào)節(jié)動物的生理活動和行為。
　　本研究以捕獲于沂南縣蒲汪鎮(zhèn)農(nóng)田的黑線倉鼠為研究對象,用RT-PCR方法分別克隆CRH及其兩種主要受體的cDNA序列。其中, CRH部分cDNA序列1112bp,包括全部編碼區(qū)(564bp),GenBank登錄號:JQ416143;CRHR1的cDNA序列703bp,為部分編碼區(qū),GenBank登錄號:JX535234;CRHR2的cDNA序列141bp。采用生物學(xué)軟件對其

4、序列和結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測分析,發(fā)現(xiàn)CRH存在可能的磷酸化位點(diǎn)和信號肽序列;兩種受體存在7個跨膜結(jié)構(gòu)域,4個胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域,4個胞外結(jié)構(gòu)域,屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族。利用SWISS-MODEL蛋白質(zhì)同源模建服務(wù)器對三者氨基酸序列進(jìn)行預(yù)測,分別得到了其145~185位、2~92和57~123位氨基酸的三級結(jié)構(gòu),其中得到了CRH的41個氨基酸組成。使用MEGA4.0對CRH、CRHR1及CRHR2進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化和聚類分析,結(jié)果與物種親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近一致。

5、r>　　隨后,本研究采用實(shí)時熒光定量PCR的方法,分別檢測雌、雄黑線倉鼠亞成年期、成年發(fā)情期和老年期三個發(fā)育時期的下丘腦、腎上腺和生殖器官中CRH、CRHR1及CRHR2的相對表達(dá)量。檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),下丘腦CRH的表達(dá)量在不同發(fā)育時期相差不大;雌雄黑線倉鼠生殖器官中CRH的表達(dá)量在成年發(fā)情期均較多,亞成年期和老年期相對較少,表明CRH與黑線倉鼠發(fā)情行為有一定的聯(lián)系。CRHR1在雌性黑線倉鼠生殖器官中的表達(dá)規(guī)律與CRH的表達(dá)比較一致,而與C

6、RHR2表達(dá)規(guī)律相反,這與之前的研究結(jié)果(CRH與CRHR1的親和力高于與CRHR2的親和力,CRH主要是通過CRHR1起作用)相吻合。
　　同時,本研究在實(shí)驗(yàn)室條件下,觀察記錄雄性黑線倉鼠相遇的攻擊行為,對其行為學(xué)參數(shù)分別進(jìn)行統(tǒng)計分析;采用實(shí)時熒光定量PCR方法,檢測黑線倉鼠下丘腦內(nèi)CRH mRNA的表達(dá)量進(jìn)行相對定量,以探究雄性黑線倉鼠攻擊行為與 CRH表達(dá)量之間的相關(guān)性。結(jié)果表明:作為典型的獨(dú)居物種,雄性黑線倉鼠同性之間攻擊

7、性較強(qiáng)。從屬組和優(yōu)勢組間的恐嚇頻次、直立防御頻次、社會行為頻次、恐嚇累積時間、回避累積時間差異顯著(P<0.05),沖擊頻次、追逐頻次、逃跑頻次、回避頻次和沖擊累積時間、追逐累積時間、逃跑累積時間、直立防御累積時間差異極顯著(P<0.01),而非社會行為頻次、社會行為累積時間、非社會行為累積時間差異不顯著。相關(guān)性分析結(jié)果顯示,雄性黑線倉鼠下丘腦的表達(dá)量與沖擊行為存在極顯著負(fù)相關(guān),與恐嚇行為存在不顯著負(fù)相關(guān),與追逐行為存在低度負(fù)相關(guān),與逃