菊花遺傳多樣性分析及CDDP指紋圖譜構(gòu)建.pdf

1、菊花（Chrysanthemum×morifolium）是菊科（Compositae）菊屬（Chrysanthemum L.）多年生草本植物，已有1600多年的栽培歷史，是我國十大傳統(tǒng)名花之一。菊花變異豐富，適應(yīng)能力強(qiáng)，分布廣泛，遺傳背景十分復(fù)雜。這給菊花種質(zhì)資源的調(diào)查與保護(hù)、鑒定與分類、遺傳多樣性分析等帶來了較大困難。因此，建立一種簡單、有效和快捷的目的基因標(biāo)記技術(shù)對(duì)菊花種質(zhì)資源鑒定和遺傳多樣性研究具有重要意義。本研究利用來源保守DN

2、A序列多態(tài)性(CDDP)標(biāo)記技術(shù)，探討53個(gè)不同花徑、瓣型、花色類型的菊花種質(zhì)資源的遺傳多樣性，為菊花品種分類和鑒定提供重要依據(jù)。
　　主要結(jié)論如下:
　　1、采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)引物濃度(設(shè)4個(gè)梯度0.25μM、0.5μM、0.75μM、1.00μM)及模板DNA濃度（40 ng、60 ng、80 ng、100 ng）進(jìn)行2因素4水平的優(yōu)化，建立了適合菊花的CDDP-PCR反應(yīng)體系。反應(yīng)總體系為20μL，其中包括2×Es T

3、aq MasterMix（含染料）10μL，10μM引物各1μL，DNA模板100 ng，ddH2O補(bǔ)充至20μL。
　　2、篩選19條帶型清晰、明亮、多態(tài)性好的CDDP引物對(duì)53份菊花材料進(jìn)行擴(kuò)增。共擴(kuò)增出241個(gè)條帶，其中223個(gè)為多態(tài)性條帶，多態(tài)性比率高達(dá)92.53％，擴(kuò)增片段大小在250～4500 bp之間。19條CDDP引物共擴(kuò)增出19條特異性條帶，特異性比率7.88％。結(jié)果表明，CDDP標(biāo)記技術(shù)信息含量豐富，能較好的揭

4、示菊花材料間的遺傳多樣性。
　　3、CDDP引物WRKY-R3可區(qū)分樣品最多，為49個(gè)，WRKY-R2B區(qū)分樣品最少，為2個(gè)，引物的Rp值分別為9.4716和1.0943，平均4.8342。引物的Rp值和可鑒定的樣品數(shù)呈正相關(guān)(y=6.2866x-4.0747，r=0.9401)。至少需要2條引物組合（如WRKY-R2和WRKY-R3）可以完全區(qū)分53份菊花材料。
　　4、利用POPGENE1.32軟件對(duì)菊花種質(zhì)資源各位點(diǎn)的

5、平均觀察等位基因數(shù)(Na)，有效等位基因數(shù)目(Ne)，Nei's基因多樣性指數(shù)(He)以及Shannon信息指數(shù)(I)進(jìn)行計(jì)算。結(jié)果顯示，53份菊花材料的平均觀察等位基因數(shù)(Na)為1.9253，平均有效等位基因數(shù)(Ne)為1.4333。平均Nei's遺傳多樣性指數(shù)(He)為0.2629，平均Shannon信息指數(shù)（I)為0.4065。53份菊花材料的遺傳距離介于0.0601（‘羅西白’與‘羅西鮮’）～0.7267（菊花腦與野菊）之間，

6、平均為0.3585。表明菊花遺傳背景比較復(fù)雜，材料間存在較豐富的遺傳多樣性。
　　5、根據(jù)NTSYS2.10e軟件計(jì)算的樣品間的遺傳相似系數(shù)矩陣，根據(jù)UPGMA法對(duì)CDDP擴(kuò)增結(jié)果作聚類分析，以0.732為閾值把53份菊花材料分為6組。第1組包括30個(gè)大菊品種和2個(gè)小菊品種。第2組包含了16小菊品種。第3組包括2個(gè)小菊品種，分別是‘小粉匙’和‘孔雀菊’。菊花腦、野菊、毛華菊各單獨(dú)聚為一類，分別在組4、組5、組6。栽培菊品種基本按照